表沒食子兒茶素沒食子酸酯對人膀胱癌T24細(xì)胞體外作用及其機制的實驗研究.pdf

1、全文分為三部分： 第一部分：表沒食子兒茶素沒食子酸酯對人膀胱癌T24細(xì)胞增殖的影響 目的:研究表沒食子兒茶素沒食子酸酯(-)-epigauocateclhin gallate,EGcG,綠茶的一種主要成分)在體外對人膀胱癌細(xì)胞系T24細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期的影響及其可能機制. 方法:采用MTT法觀察不同濃度的EGCG(10,20,40,和80μg/mL)作用不同時間(12,24,36,和48h)后對T24細(xì)胞增殖的影

2、響.同時應(yīng)用集落形成試驗觀察不同濃度的EGCG(1,5,10,20和40μg/ml)對T24細(xì)胞集落形成的影響.收獲不同濃度EGCG(10,20,40,和80μgmL)作用24小時的T24細(xì)胞,碘化丙錠(PI)染色后經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測,并對獲取數(shù)據(jù)進(jìn)行細(xì)胞周期分析.應(yīng)用Westernblotting方法檢測與細(xì)胞周期調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白Cyclin D1和CDK4的表達(dá),以觀察EGCG作用對其影響. 結(jié)論:EGCG能顯著抑制T24細(xì)胞增殖

3、和集落形成,其抑制作用呈時間和劑量依賴性.EGCG能顯著抑制T24細(xì)胞中Cyclin D1和CDK4的表達(dá),其可能是誘導(dǎo)T24細(xì)胞G0/G1期阻滯的分子機制之一. 第二部分：表沒食子兒茶素沒食子酸酯對人膀胱癌T24細(xì)胞凋亡的影響 目的:研究.EGCG在體外對人膀胱癌細(xì)胞系T24細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用,并探討其誘導(dǎo)凋亡的相關(guān)信號通路等分子機制. 方法:研究EGCG對T24細(xì)胞增殖的抑制作用是否為誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的結(jié)果.用光

4、學(xué)顯微鏡及熒光染色觀察經(jīng)EGCG作用后T24細(xì)胞具有的凋亡形態(tài)學(xué)改變.采用流式細(xì)胞儀(PI和annexin v雙染法)檢測細(xì)胞凋亡率的變化.采用Western blotting方法檢測不同濃度.EGCG(10,20,40,和8μg/mL)作用24小時后T24細(xì)胞中P13K/Akt和MAPK(Erk)兩條信號通路的改變.同時研究了caspase-3,PARP,Bcl-2家族等蛋白在誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡中的作用. 結(jié)論: EGCG 能誘導(dǎo)T

5、24細(xì)胞凋亡,凋亡的誘導(dǎo)作用呈顯著劑量依賴性.EGCG能顯著抑制T24細(xì)胞P13K/Akt信號通路的激活從而調(diào)節(jié)Bcl-2家族等蛋白并最終誘導(dǎo)凋亡發(fā)生. 第三部分：表沒食子兒茶素沒食子酸酯對人膀胱癌T24細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的影響 目的:研究EGCG在體外對人膀胱癌細(xì)胞系T24細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響及其可能機制. 方法: MTT 法檢測EGCG對T24細(xì)胞粘附纖維連接蛋白 (fibronectin) 能力的影響,Tran

6、swell 小室進(jìn)行人工重組基底膜侵襲實驗檢測EGCG對T24細(xì)胞侵襲能力的影響,劃痕愈合試驗檢測EGCG對T24細(xì)胞遷移能力的影響.采用RT-PCR方法檢測EGCG(10,20,40,和80μg/mE)作用24小時后的T24細(xì)胞中MMP-9mRNA和MMP-2 mRNA的表達(dá).采用Western blotting方法檢測EGCG(10,20,40,和80μg/mL)作用24小時后的T24細(xì)胞中MMP-9蛋白的表達(dá). 結(jié)論:EG