表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯體外對(duì)人結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：觀察表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯（Epigallaocatechin-3-gallate,EGCG）對(duì)人結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞增殖的影響，并初步探討其分子機(jī)制。
　　方法：體外培養(yǎng)人結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞，采用MTT比色法檢測(cè)EGCG對(duì)HT-29細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用；應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)分析EGCG對(duì)HT-29細(xì)胞周期分布的影響；使用免疫細(xì)胞化學(xué)、免疫印跡等方法觀測(cè)EGCG對(duì)HT-29細(xì)胞周期相關(guān)蛋白（p53、PCNA、p38MAPK、RB

2、）表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：MTT比色結(jié)果顯示EGCG能呈濃度依賴性抑制HT-29細(xì)胞的增殖。不同濃度EGCG（30μg/ml、40μg/ml、50μg/ml、60μg/ml）對(duì)HT-29細(xì)胞（24h、48h、72h、96h）具有明顯的生長(zhǎng)抑制效應(yīng)，并呈劑量-效應(yīng)和時(shí)間-效應(yīng)依賴關(guān)系（P<0.05）；細(xì)胞活力檢測(cè)結(jié)果顯示，對(duì)照組與EGCG各濃度處理組細(xì)胞存活率差異無(wú)顯著性（P>0.05）；光鏡下，與對(duì)照組比較，處理組瘤細(xì)胞稀疏，數(shù)量

3、明顯減少，細(xì)胞異型性變小，形態(tài)較為一致，胞漿較豐富，核變小，大小較為一致，核漿比例增大，核仁不明顯，胞漿內(nèi)細(xì)胞器豐富；流式細(xì)胞術(shù)分析結(jié)果顯示， EGCG誘導(dǎo)人結(jié)腸癌細(xì)胞G1期阻滯，且隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)，其誘導(dǎo)周期阻滯的效應(yīng)越明顯（P<0.05），相同時(shí)間處理組，不同濃度處理與空白對(duì)照相比均發(fā)生了G1期阻滯（P<0.05）；免疫細(xì)胞化學(xué)圖像定量分析顯示：經(jīng)EGCG(50μg/mL，48h)處理后，人結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞中p53、PCNA蛋

4、白陽(yáng)性率較未處理組顯著降低（P<0.05）；蛋白免疫印跡顯示：EGCG能下調(diào)p38MAPK、RB蛋白的磷酸化水平，其作用與濃度和作用時(shí)間相關(guān)，能下調(diào)Cyclin D1蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)論：
　　1．EGCG對(duì)體外培養(yǎng)的人結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞具有明顯的增殖抑制作用，并呈濃度-時(shí)間依賴關(guān)系。
　　2．EGCG抑制HT-29細(xì)胞增殖作用與誘導(dǎo)細(xì)胞周期G1期阻滯有關(guān)。
　　3．EGCG可能通過(guò)抑制p38MAPK、RB蛋