中華眼鏡蛇毒及其組分神經(jīng)毒素對皮膚移植排斥反應的抑制作用及其機制研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  探究中華眼鏡蛇蛇毒(Naja naja atra venom,NNAV)及其組分神經(jīng)毒素(Neurotoxin,NTX)對皮膚移植引起的免疫排斥反應的抑制作用及機制。
  方法:
  建立大鼠同種異體皮膚移植模型誘導免疫排斥反應,對移植皮片和免疫臟器進行H&E染色檢查病理變化、CCK-8法檢測淋巴細胞增殖實驗、ELISA檢測血清和細胞上清IL-2和IFN-γ含量、流式分析CD4與CD8 T細胞增殖分化等方法

2、探究NNAV及NTX對大鼠皮膚移植引起的免疫排斥反應的抑制作用;通過CCK-8法檢測NTX體外給藥細胞毒性及非毒性劑量內(nèi)對淋巴細胞增殖的影響;通過建立混合淋巴細胞培養(yǎng)(mixed lymphocyte culture,MLC)模型檢測NTX在非毒性劑量內(nèi)對體外細胞免疫排斥反應的影響;通過激活或阻滯膽堿能受體探究NTX作用靶點;通過CCK-8法檢測淋巴細胞增殖檢測NT X長期口服給藥對淋巴細胞增殖的影響;通過碘化丙啶(Propidium

3、Iodide,PI)染色檢測 T細胞周期,二醋酸鹽琥珀酰亞胺脂(Carboxy Fluoroscein Succinimidyl Ester,CFSE)染色檢測T細胞增殖,流式分析NTX對正常大鼠淋巴細胞功能影響。
  結果:
  在皮膚移植大鼠模型中,NNAV(20μg/kg、40μg/kg、80μg/kg)能顯著延長移植皮片存活時間;減輕排斥引起的炎癥細胞浸潤及其他病理損傷;逆轉由排斥引起的免疫器官臟器指數(shù)的上升;抑制排

4、斥引起的血清中Th1細胞因子IL-2和IFN-γ的表達升高;抑制由排斥引起的T淋巴細胞增殖反應。NTX(10μg/kg、20μg/kg、40μg/kg)能顯著延長移植皮片存活時間;減輕排斥引起的炎癥細胞浸潤及其他病理損傷,恢復免疫器官生發(fā)中心(Germinal Center,GC)的形成;逆轉由排斥引起的免疫器官臟器指數(shù)的上升;減弱排斥引起的血清及淋巴細胞上清液中 Th1細胞因子IL-2和IFN-γ的表達升高;抑制由排斥引起的T淋巴細胞

5、大量增殖;逆轉排斥發(fā)生時由CD4T細胞大量分化引起的CD4/CD8比值上升。體外實驗中NTX(1μg/ml)以上劑量會產(chǎn)生明顯的細胞毒性;非毒性劑量的NTX可顯著抑制混合淋巴細胞培養(yǎng)中淋巴細胞的增殖,及ConA誘導的T細胞增殖;M受體的拮抗可加強NTX抑制T細胞增殖的能力,相反M受體的激活會削弱NTX的作用。在正常機體中,NTX(10μg/kg、20μg/kg、40μg/kg)長期口服給藥能顯著抑制T細胞活力,將細胞周期阻滯在G0/G1

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