中華眼鏡蛇毒及其組分神經(jīng)毒素對皮膚移植排斥反應的抑制作用及其機制研究.pdf

1、目的：
　　探究中華眼鏡蛇蛇毒（Naja naja atra venom,NNAV）及其組分神經(jīng)毒素（Neurotoxin,NTX）對皮膚移植引起的免疫排斥反應的抑制作用及機制。
　　方法：
　　建立大鼠同種異體皮膚移植模型誘導免疫排斥反應，對移植皮片和免疫臟器進行H&E染色檢查病理變化、CCK-8法檢測淋巴細胞增殖實驗、ELISA檢測血清和細胞上清IL-2和IFN-γ含量、流式分析CD4與CD8 T細胞增殖分化等方法

2、探究NNAV及NTX對大鼠皮膚移植引起的免疫排斥反應的抑制作用；通過CCK-8法檢測NTX體外給藥細胞毒性及非毒性劑量內(nèi)對淋巴細胞增殖的影響；通過建立混合淋巴細胞培養(yǎng)（mixed lymphocyte culture,MLC）模型檢測NTX在非毒性劑量內(nèi)對體外細胞免疫排斥反應的影響；通過激活或阻滯膽堿能受體探究NTX作用靶點；通過CCK-8法檢測淋巴細胞增殖檢測NT X長期口服給藥對淋巴細胞增殖的影響；通過碘化丙啶（Propidium

3、Iodide，PI）染色檢測 T細胞周期，二醋酸鹽琥珀酰亞胺脂（Carboxy Fluoroscein Succinimidyl Ester，CFSE）染色檢測T細胞增殖，流式分析NTX對正常大鼠淋巴細胞功能影響。
　　結果：
　　在皮膚移植大鼠模型中，NNAV（20μg/kg、40μg/kg、80μg/kg）能顯著延長移植皮片存活時間；減輕排斥引起的炎癥細胞浸潤及其他病理損傷；逆轉由排斥引起的免疫器官臟器指數(shù)的上升；抑制排

4、斥引起的血清中Th1細胞因子IL-2和IFN-γ的表達升高；抑制由排斥引起的T淋巴細胞增殖反應。NTX（10μg/kg、20μg/kg、40μg/kg）能顯著延長移植皮片存活時間；減輕排斥引起的炎癥細胞浸潤及其他病理損傷，恢復免疫器官生發(fā)中心（Germinal Center，GC）的形成；逆轉由排斥引起的免疫器官臟器指數(shù)的上升；減弱排斥引起的血清及淋巴細胞上清液中 Th1細胞因子IL-2和IFN-γ的表達升高；抑制由排斥引起的T淋巴細胞

5、大量增殖；逆轉排斥發(fā)生時由CD4T細胞大量分化引起的CD4/CD8比值上升。體外實驗中NTX（1μg/ml）以上劑量會產(chǎn)生明顯的細胞毒性；非毒性劑量的NTX可顯著抑制混合淋巴細胞培養(yǎng)中淋巴細胞的增殖，及ConA誘導的T細胞增殖；M受體的拮抗可加強NTX抑制T細胞增殖的能力，相反M受體的激活會削弱NTX的作用。在正常機體中，NTX（10μg/kg、20μg/kg、40μg/kg）長期口服給藥能顯著抑制T細胞活力，將細胞周期阻滯在G0/G1