瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞CDC2L1基因高甲基化通過上調(diào)BcL-2蛋白抑制細(xì)胞凋亡的研究.pdf

1、[目的]
　　瘢痕疙瘩是一種良性真皮腫瘤，它是整形外科領(lǐng)域的重點(diǎn)和難點(diǎn)之一，其形成機(jī)制迄今尚未完全明確，瘢痕疙瘩相關(guān)調(diào)控基因已成為當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。本課題組在國際上首先發(fā)現(xiàn)CDC2L1基因與瘢痕疙瘩的發(fā)生密切相關(guān)，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)瘢痕疙瘩組織中CDC2L1基因存在高甲基化，其表達(dá)活性降低、細(xì)胞凋亡減少。本實(shí)驗(yàn)通過體外培養(yǎng)原代人瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞，進(jìn)一步在細(xì)胞水平探討CDC2L1基因甲基化水平與細(xì)胞凋亡的關(guān)系，及其對(duì)關(guān)鍵因子Bcl-2表

2、達(dá)的影響。通過CDC2L1基因甲基化水平影響瘢痕疙瘩細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究，為瘢痕疙瘩的治療提供新的理論依據(jù)。
　　[方法]
　　應(yīng)用組織塊貼壁法培養(yǎng)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞6例，應(yīng)用顯微鏡觀察法和細(xì)胞免疫鑒定法，鑒定所培養(yǎng)細(xì)胞為成纖維細(xì)胞;然后應(yīng)用甲基化特異性PCR法檢測(cè)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞中CDC2L1基因甲基化水平;再以存在高甲基化的瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)和western blot法分別檢測(cè)5-aza-dC加

3、藥組和未加藥組組的細(xì)胞凋亡情況及CDC2L1和Bcl-2的表達(dá)。
　　[結(jié)果]
　　1.組織塊貼壁法可以培養(yǎng)出實(shí)驗(yàn)所需的瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞。顯微鏡觀察和細(xì)胞免疫鑒定皆表明所培養(yǎng)的細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)所需的成纖維細(xì)胞。
　　2.MSP法檢測(cè)結(jié)果示:在6例標(biāo)本所培養(yǎng)的瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞中，有5例存在CDC2L1基因高甲基化。
　　3.用5-aza-dC處理過的瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞與未加藥組相比，細(xì)胞凋亡增加(P＜0.01)，CD

4、C2L1基因表達(dá)增高(P＜0.05)，Bcl-2表達(dá)減少(P＜0.05)。
　　[結(jié)論]
　　在瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞中，CDC2L1基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島存在高甲基化;DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-aza-dC可能能逆轉(zhuǎn)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞CDC2L1基因高甲基化，進(jìn)而導(dǎo)致CDC2L1表達(dá)上調(diào)，Bcl-2表達(dá)減少，細(xì)胞凋亡增加。CDC2L1基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島發(fā)生高甲基化，可導(dǎo)致CDC2L1基因表達(dá)下降，進(jìn)而可能通過下調(diào)細(xì)胞凋亡相關(guān)