嗜酸乳桿菌誘導(dǎo)HT-29細(xì)胞凋亡效應(yīng)和機(jī)制研究.pdf

1、嗜酸乳桿菌是一種重要的益生菌，具有抗腫瘤的益生作用。但是嗜酸乳桿菌誘導(dǎo)結(jié)腸癌凋亡的具體機(jī)制還知之甚少，不具有系統(tǒng)性。本文擬從離體培養(yǎng)的結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞和裸鼠結(jié)腸癌皮下移植瘤模型(HT-29細(xì)胞造模)兩方面探究嗜酸乳桿菌CICC6074誘導(dǎo)結(jié)腸癌凋亡的具體機(jī)制。
　　本課題主要的研究方法和結(jié)果如下:
　　第2章:通過(guò)粘附實(shí)驗(yàn)優(yōu)化嗜酸乳桿菌CICC6074粘附HT-29細(xì)胞最佳粘附條件為感染比100∶1，48h，環(huán)境pH為6

2、。采用CCK-8方法檢測(cè)嗜酸乳桿菌CICC6074能抑制HT-29細(xì)胞增殖。嗜酸乳桿菌CICC6074作用細(xì)胞48h，抑制效果顯著(P＜0.05)，感染比100∶1的抑制率最大為57.25％。但對(duì)正常的結(jié)腸細(xì)胞沒(méi)有不良影響，不存在潛在的安全性問(wèn)題。透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，嗜酸乳桿菌CICC6074能誘導(dǎo)HT-29細(xì)胞染色質(zhì)濃縮、聚集，斷裂，還產(chǎn)生很多空泡等細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)改變。
　　第3章:采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Rodamine123熒光強(qiáng)

3、度來(lái)反應(yīng)HT-29的線粒體膜電位(ΔΨm)的變化。嗜酸乳桿菌CICC6074作用細(xì)胞24h或48h，呈濃度依賴型誘導(dǎo)HT-29細(xì)胞ΔΨm下降。采用Western blot檢測(cè)HT-29細(xì)胞細(xì)胞色素C(Cyt-c)、Bax、Bcl-2、Caspase9和Caspase3蛋白表達(dá)量變化。嗜酸乳桿菌CICC6074作用細(xì)胞24h或48h，呈濃度依賴型促進(jìn)線粒體Cyt-C釋放到胞漿，上調(diào)促凋亡蛋白Bax、Caspase9、Caspase3蛋白表

4、達(dá)量，下調(diào)抑凋亡蛋白Bcl-2蛋白表達(dá)量。嗜酸乳桿菌CICC6074可能通過(guò)線粒體途徑介導(dǎo)HT-29細(xì)胞凋亡。
　　第4章:通過(guò)建立結(jié)腸癌裸鼠皮下移植瘤模型，研究嗜酸乳桿菌CICC6074誘導(dǎo)HT-29細(xì)胞凋亡的效果和途徑。高劑量的嗜酸乳桿菌CICC6074連續(xù)灌胃28天有誘導(dǎo)結(jié)腸癌凋亡的效應(yīng)，并可能通過(guò)線粒體途徑介導(dǎo)結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞的凋亡。
　　總之，本課題通過(guò)體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)表明嗜酸乳桿菌CICC6074呈濃度依賴型誘