大麥多糖對HT-29細胞的抗癌作用及機制研究.pdf

1、大麥在我國的種植史上具有悠久歷史，來源相當普遍。大麥多糖是一種生物大分子活性物質(zhì)，但目前我國對大麥生物活性的研究相對較少。本次實驗主要以大麥為原料，篩查不同大麥品種對結腸癌細胞的作用，并從分子水平上探討其作用機制，從而為大麥的綜合加工利用提供相應的理論依據(jù)。
　　本實驗采用體外增殖抑制實驗(MTT)法初步篩查了13種大麥水提粗多糖對HT-29細胞的抑制作用，結果顯示大麥藏青25對HT-29細胞具有明顯的抑制作用，抑制率達到40％左

2、右。采用水提醇沉法提取藏青25號大麥多糖，分別得到50％、60％和70％三種醇沉組分，利用MTT法檢測三種醇沉組分對HT-29細胞的抑制作用，結果顯示50％的醇沉組分對HT-29細胞具有較好的抑制作用，故選擇50％的醇沉組分進行后續(xù)實驗研究。首先對其進行脫脂、除蛋白等處理，并經(jīng)Sepharose CL-4B色譜柱(id1.6×60 cm)對其進一步的分離、純化，得到相對均一的組分（BP-1、BP-2、BP-3、BP-4、BP-5）。采用

3、MTT法檢測各組分活性，實驗結果表明BP-1組分具有較高活性，高效液相層析色譜分析鑒定BP-1分子量為6776kDa，純度相對較高的宏觀均一組分。BP-1平均糖含量為94.58％，基本不含蛋白質(zhì)，綜合利用顯色實驗、紫外光譜、紅外光譜、氣相色譜對其理化性質(zhì)分析，表明BP-1是由β-D-吡喃糖環(huán)構成，且不含有還原性羰基、酚羥基、游離蛋白質(zhì)、核酸類物質(zhì)的非淀粉類多糖，其單糖組成為鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖，摩爾比為1.00∶1.50∶1.

4、92∶8.82。
　　MTT實驗結果表明BP-1對人結腸癌細胞HT-29具有顯著的抑制作用，并呈現(xiàn)濃度和時間依賴關系，作用48h的效果最佳，此時的半數(shù)抑制濃度約為48.18μg/mL。DAPI染色、AO/EB雙染、掃描電鏡和流式細胞術等觀察結果顯示:經(jīng)BP-1作用的HT-29細胞呈現(xiàn)明顯的凋亡形態(tài)學改變，且細胞被阻滯在G0/G1期，凋亡率也隨作用時間的延長而增加。通過羅丹明染色發(fā)現(xiàn):經(jīng)過BP-1作用后，HT-29細胞線粒體的膜電位