大麥多糖對(duì)HT-29細(xì)胞的抗癌作用及機(jī)制研究.pdf

1、大麥在我國(guó)的種植史上具有悠久歷史，來(lái)源相當(dāng)普遍。大麥多糖是一種生物大分子活性物質(zhì)，但目前我國(guó)對(duì)大麥生物活性的研究相對(duì)較少。本次實(shí)驗(yàn)主要以大麥為原料，篩查不同大麥品種對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞的作用，并從分子水平上探討其作用機(jī)制，從而為大麥的綜合加工利用提供相應(yīng)的理論依據(jù)。
　　本實(shí)驗(yàn)采用體外增殖抑制實(shí)驗(yàn)(MTT)法初步篩查了13種大麥水提粗多糖對(duì)HT-29細(xì)胞的抑制作用，結(jié)果顯示大麥藏青25對(duì)HT-29細(xì)胞具有明顯的抑制作用，抑制率達(dá)到40％左

2、右。采用水提醇沉法提取藏青25號(hào)大麥多糖，分別得到50％、60％和70％三種醇沉組分，利用MTT法檢測(cè)三種醇沉組分對(duì)HT-29細(xì)胞的抑制作用，結(jié)果顯示50％的醇沉組分對(duì)HT-29細(xì)胞具有較好的抑制作用，故選擇50％的醇沉組分進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究。首先對(duì)其進(jìn)行脫脂、除蛋白等處理，并經(jīng)Sepharose CL-4B色譜柱(id1.6×60 cm)對(duì)其進(jìn)一步的分離、純化，得到相對(duì)均一的組分（BP-1、BP-2、BP-3、BP-4、BP-5）。采用

3、MTT法檢測(cè)各組分活性，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明BP-1組分具有較高活性，高效液相層析色譜分析鑒定BP-1分子量為6776kDa，純度相對(duì)較高的宏觀均一組分。BP-1平均糖含量為94.58％，基本不含蛋白質(zhì)，綜合利用顯色實(shí)驗(yàn)、紫外光譜、紅外光譜、氣相色譜對(duì)其理化性質(zhì)分析，表明BP-1是由β-D-吡喃糖環(huán)構(gòu)成，且不含有還原性羰基、酚羥基、游離蛋白質(zhì)、核酸類物質(zhì)的非淀粉類多糖，其單糖組成為鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖，摩爾比為1.00∶1.50∶1.

4、92∶8.82。
　　MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明BP-1對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29具有顯著的抑制作用，并呈現(xiàn)濃度和時(shí)間依賴關(guān)系，作用48h的效果最佳，此時(shí)的半數(shù)抑制濃度約為48.18μg/mL。DAPI染色、AO/EB雙染、掃描電鏡和流式細(xì)胞術(shù)等觀察結(jié)果顯示:經(jīng)BP-1作用的HT-29細(xì)胞呈現(xiàn)明顯的凋亡形態(tài)學(xué)改變，且細(xì)胞被阻滯在G0/G1期，凋亡率也隨作用時(shí)間的延長(zhǎng)而增加。通過(guò)羅丹明染色發(fā)現(xiàn):經(jīng)過(guò)BP-1作用后，HT-29細(xì)胞線粒體的膜電位