靶向SIRT1的小干擾RNA抑制宮頸癌C33A細胞增殖的實驗研究.pdf

1、目的：通過在細胞水平研究SIRT1對宮頸癌C33A細胞的增殖、遷移、侵襲、凋亡的影響及其SIRT1與Notch信號通路相關(guān)蛋白的關(guān)系，探討SIRTl在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　方法：以化學合成的靶向SIRT1基因的小干擾RNA（siRNA）轉(zhuǎn)染C33A細胞，并分為四組：SIRT1-siRNA組、SIRT1陰性對照組、Lipofectamine?RNAi MAX組和空白細胞對照組。轉(zhuǎn)染細胞72h后，分別提取各組細胞總RNA和蛋

2、白，RT-PCR檢測C33A細胞SIRT1 mRNA的表達，免疫印跡法檢測C33A細胞中SIRT1、Notch1及Hes1等目的蛋白的表達，CCK-8法檢測細胞增殖，分別應用Transwell細胞遷移實驗及Transwell細胞侵襲實驗檢測C33A細胞的遷移及侵襲能力，流式AnnexinV-PE雙染法及Hoechst33258細胞核熒光染色法檢測細胞凋亡。
　　結(jié)果：RT-PCR結(jié)果表明：與空白細胞對照組及RNAi MAX組相比，

3、SIRT1-siRNA組細胞SIRT1 mRNA表達明顯下調(diào)(P＜0.05)。Western blot結(jié)果顯示：與空白細胞對照組、SIRT1陰性對照組、RNAi MAX組相比，SIRT1-siRNA組細胞SIRT1蛋白表達量明顯下調(diào)(P＜0.05)，Notch1和 Hes1蛋白的表達明顯上調(diào)(P＜0.05)。CCK-8細胞增殖實驗結(jié)果表明：SIRT1-siRNA組細胞增殖抑制率為53.1％，SIRT1陰性對照組細胞增殖抑制率為35.4％

4、，RNAi MAX組細胞增殖抑制率11.5％，SIRT1-siRNA組細胞增殖抑制率明顯高于其他組。細胞遷移及侵襲實驗結(jié)果顯示：與SIRT1陰性對照組、RNAi MAX組和空白細胞對照組相比，SIRT1-siRNA組穿過人工基底膜細胞數(shù)明顯減少(P<0.05)。流式細胞術(shù)結(jié)果表明：與 SIRT1陰性對照組、RNAi MAX組和空白細胞對照組相比，SIRT1-siRNA組C33A細胞早期凋亡率明顯增高(P<0.05)。Hoechst332