靶向Survivin基因的RNA干擾抑制膀胱癌生長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的和意義:膀胱癌是我國(guó)泌尿生殖系統(tǒng)最常見(jiàn)惡性腫瘤，首次確診時(shí)多為表淺性。目前對(duì)表淺性膀胱癌常規(guī)治療為經(jīng)尿道電切術(shù)(TUR)、術(shù)后輔以膀胱灌注化療或免疫治療。即使如此膀胱癌仍有較高的復(fù)發(fā)率，因此開(kāi)發(fā)新的膀胱內(nèi)灌注藥物是膀胱癌研究的一個(gè)方向。Survivin是腫瘤基因治療的潛在靶點(diǎn)，而RNA干擾是近年發(fā)現(xiàn)的高效基因沉默方法。本研究承接前期實(shí)驗(yàn)成果，探討了靶向 Survivin基因的RNA干擾對(duì)膀胱癌細(xì)胞T24皮下腫瘤生長(zhǎng)的影響，以及在原位

2、動(dòng)物模型中對(duì)膀胱癌的治療作用。 方法: (1)構(gòu)建Survivin基因shgNA真核表達(dá)載體pRNAT-survivin，轉(zhuǎn)染人膀胱癌細(xì)胞T24并獲得穩(wěn)定的單克隆細(xì)胞。實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染干擾質(zhì)粒后T24細(xì)胞Survivin mRNA變化，將穩(wěn)定轉(zhuǎn)染干擾質(zhì)粒的單克隆細(xì)胞與未轉(zhuǎn)染的T24細(xì)胞分別接種于5只裸鼠皮下，觀(guān)察腫瘤生長(zhǎng)情況，腫瘤組織行免疫組化檢測(cè)Survivin蛋白表達(dá)。 (2)直視下經(jīng)尿道機(jī)械損傷B

3、ALB/c裸鼠膀胱粘膜，將人膀胱癌T24細(xì)胞經(jīng)尿道種植于25只裸鼠膀胱，建立荷人膀胱癌原位動(dòng)物模型。以Gd-DTPA作為膀胱造影劑，每周取5只裸鼠行MR檢測(cè)腫瘤的生長(zhǎng)，MR檢查后即取裸鼠膀胱組織標(biāo)本行HE染色進(jìn)行病理學(xué)檢查。 (3)同法建立膀胱癌動(dòng)物模型分為4組，每組6只裸鼠，A組：不予任何處理；B組：膀胱灌注濃度0.5 mg，ml的絲裂霉素；C組：膀胱灌注濃度為150μg/ml RNAi-survivin的干擾質(zhì)粒；D組：干擾

4、質(zhì)粒和絲裂霉素交替膀胱灌注；膀胱灌注治療6次后荷瘤膀胱稱(chēng)重，行病理學(xué)檢查及免疫組化檢測(cè)膀胱腫瘤Survivin、Caspase-3表達(dá)。 結(jié)論: (1)靶向Survivin的shRNA持久地抑制了膀胱癌細(xì)胞T24裸鼠皮下移植瘤生長(zhǎng)；Survivin基因可作為膀胱癌基因治療的良好靶點(diǎn)。 (2)成功建立了裸鼠原位膀胱癌動(dòng)物模型，腫瘤生長(zhǎng)基本模擬了人膀胱癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程；MR檢查可作為對(duì)裸鼠膀胱原位腫瘤動(dòng)態(tài)觀(guān)察的可靠

5、方法。 (3)靶向Survivin的干擾質(zhì)粒膀胱灌注可達(dá)到與絲裂霉素相近的效果，兩者交替膀胱灌注可明顯增加絲裂霉素的抗腫瘤作用?？赡軝C(jī)制為阻斷膀胱腫瘤Survivin表達(dá)引起腫瘤細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤生長(zhǎng)；因與絲裂霉素作用于不同細(xì)胞周期增強(qiáng)了膀胱腫瘤對(duì)絲裂霉素的化療敏感性。 綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)靶向Survivin的RNA干擾對(duì)膀胱癌細(xì)胞T24裸鼠皮下及原位移植瘤的抑制作用，結(jié)合前期體外實(shí)驗(yàn)結(jié)論，認(rèn)為Survivin基因可作