RASSF10基因在腎細胞癌中mRNA表達及甲基化狀態(tài)研究.pdf

1、目的：腎細胞癌是泌尿系常見的惡性腫瘤，占成人惡性腫瘤的2％-3%，近年來其發(fā)病率逐年升高，嚴重威脅人類健康，在發(fā)達國家，其發(fā)病率上升更快，大部分腎癌是散發(fā)性的，家族遺傳性腎癌發(fā)病較少。腎細胞癌發(fā)病機制復雜，流行病學資料表明所有形式的煙草暴露都是其公認的危險因素，并且隨煙草累積劑量和年限延長其危險度增高，同時肥胖，高蛋白、高脂肪、低蔬菜飲食也是其危險因素。隨著分子生物學的研究發(fā)展，除這些危險因素外，腎癌的發(fā)生還與基因突變、失活、表觀遺傳學

2、改變等有關(guān)，尤其是 DNA甲基化改變，已成為腫瘤研究中的重要方法。RASSF家族（RASSF1-RASSF10）是 Ras信號通路負向調(diào)節(jié)基因家族，其大多數(shù)成員都因基因啟動子甲基化改變導致表達缺失而在多種腫瘤進展中發(fā)生作用。RASSF10基因啟動子高甲基化在兒童急性淋巴細胞白血病、甲狀腺癌、黑色素瘤、前列腺癌等研究中已有文獻報道，是一個潛在的抑癌基因，但RASSF10基因在腎細胞癌中尚未見類似研究報道，其表達水平及甲基化狀態(tài)又如何？本課

3、題旨在通過分析RASSF10基因在人腎細胞癌、癌旁及正常組織之間表達情況及甲基化結(jié)果，明確其在腎癌組織、癌旁及正常組織中有無表達差異，甲基化結(jié)果有無差異，mRNA與基因啟動子區(qū)甲基化關(guān)系，并統(tǒng)計分析RASSF10基因表達水平、甲基化結(jié)果和腎細胞癌患者臨床資料之間關(guān)系，探討RASSF10基因在腎細胞癌發(fā)生、發(fā)展中的作用，為腎細胞癌診斷、治療提供新的靶點和思路。
　　方法：
　　1利用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）檢測52例

4、腎細胞癌組織、癌旁及正常組織中 RASSF10基因 mRNA相對表達量，統(tǒng)計分析其 mRNA相對表達量與臨床資料之間關(guān)系。
　　2利用甲基化特異性聚合酶鏈反應（MSP）檢測52例腎細胞癌組織、癌旁及正常組織中RASSF10基因的甲基化狀態(tài)，結(jié)合相關(guān)臨床資料，用統(tǒng)計學分析處理實驗數(shù)據(jù)，探討RASSF10基因在腎細胞癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。
　　結(jié)果：
　　1在對52例腎細胞癌組織、癌旁及正常組織應用甲基化特異性聚合酶鏈反應

5、檢測中，發(fā)現(xiàn)存在三種不同的甲基化狀態(tài)，即完全甲基化，不完全甲基化，完全非甲基化。
　　2利用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）檢測52例腎細胞癌組織、癌旁及正常組織中RASSF10基因的mRNA表達水平時，發(fā)現(xiàn)其相對表達量分別為0.62±0.04、0.74±0.03、0.75±0.05，經(jīng)統(tǒng)計學處理分析，發(fā)現(xiàn)癌組織中 RASSF10基因的 mRNA表達水平低于癌旁及正常組織中該基因的mRNA表達量，均有統(tǒng)計學差異（P<0.01）；

6、正常腎組織 RASSF10基因的 mRNA相對表達量均值雖高于癌旁組織中該基因相對表達量，但二者之間的差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。
　　3在52例腎癌組織中，RASSF10基因的mRNA相對表達量與患者性別（t=1.29，P=0.202）、年齡（t=-1.94，P=0.060）、病理類型（t=-1.54， P=0.131）、腫瘤體積（t=1.99，P=0.052）這些臨床資料之間并無顯著差異（P均>0.05）。
　　4

7、在52例腎細胞癌組織中，RASSF10基因甲基化率為69.2%（36/52例），癌旁組織中RASSF10基因甲基化率為36.5%（19/52例），正常腎組織中RASSF10基因甲基化率為25.0%（13/52例），腎細胞癌組織中甲基化率高于癌旁組織的甲基化率（?2=11.15，P=0.001），癌組織甲基化率也明顯高于正常組織中甲基化率（?2=20.41，P=0.000），差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。男性組RASSF10基因甲基

8、化發(fā)生率69.7%（23/33），女性組 RASSF10基因甲基化發(fā)生率68.4%（13/19），差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。年齡大于等于60歲組中RASSF10基因甲基化發(fā)生率為73.9%（17/23），年齡不足60歲組RASSF10基因甲基化發(fā)生率65.5%（19/29），差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。透明細胞癌組RASSF10基因甲基化發(fā)生率68.3%（28/41），非透明細胞癌組 RASSF10基因甲基化發(fā)生率72.7

9、%（8/11），差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。腫瘤體積≥7cm組中RASSF10基因甲基化發(fā)生率68.6%（24/35），腫瘤體積<7cm組中RASSF10基因甲基化發(fā)生率70.6%（12/17），差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。Fuhrman分級方面，高分化組RASSF10基因甲基化率為62.5%（5/8），中分化組RASSF10基因甲基化率為66.7%（16/24），低分化或未分化組 RASSF10基因甲基化率為75.0%（1

10、5/20），三組比較無統(tǒng)計學差異（P>0.05）。
　　5 RASSF10基因啟動子區(qū)甲基化與患者性別（?2=0.01，P=0.923）、年齡（?2=0.42，P=0.514）、病理類型（?2=0.08，P=0.78）、腫瘤體積（?2=0.02， P=0.882）、Fuhrman分級（?2=0.56，P=0.757）無相關(guān)性（P均>0.05），與腫瘤的 TNM分期有一定的相關(guān)性（P<0.05），腫瘤 TNM分期Ⅲ-Ⅳ的患者比Ⅰ-Ⅱ

11、期的甲基化率高（P=0.043）。
　　6在癌組織中，甲基化狀態(tài)陰性的病例其 mRNA表達水平高于甲基化狀態(tài)陽性病例mRNA表達水平，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1 RCC組織中RASSF10基因mRNA表達水平減低或缺失，明顯低于癌旁及正常組織中該基因mRNA相對表達量。
　　2 RCC組織中RASSF10基因啟動子甲基化陽性率明顯高于癌旁及正常組織，并且與腫瘤TNM分期正相關(guān)。