高遷移率族蛋白B1對早期結直腸腫瘤VEGF-A表達和毛細血管生成的影響.pdf

1、背景：高遷移率組蛋白B1（HMGB1）分泌到胞外作為一種晚期炎癥介質，不僅可參與多種炎癥的發(fā)生，而且還在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用，可能涉及細胞凋亡、免疫逃逸及淋巴轉移。最近研究發(fā)現HMGB1在體外可能促進毛細血管形成過程。本課題對其在早期結直腸腫瘤毛細血管生成及血管內皮生長因子（VEGF-A）中的作用進行深入研究，以期為結直腸腺瘤向早癌轉化機制提供新的視角及理論依據。
　　第一部分結直腸早期腫瘤HMGB1及VEGF-A的表達

2、和對毛細血管生成的作用
　　目的：探討HMGB1對早期結直腸腫瘤組織VEGF-A表達及毛細血管生成的影響。方法：根據Sano分型在窄帶顯像技術（NBI）下將早期結直腸腫瘤分為CP-I、II、IIIA及IIIB組，并設健康對照組（NC）；應用蛋白印跡及免疫組織化方法檢測各組HMGB1及VEGF-A的表達，并分析其相關性。結果：免疫組化方法表明HMGB1及VEGF-A在NC、CP-I、II、IIIA及IIIB組的陽性表達率分別為44.

3、0％、53.6%、75.7%、85.0%、88.8%和12.0%、21.4%、53.6%、70.0%、88.8%，各組間差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。IIIA和IIIB組HMGB1的高表達率均為60.0%及72.2%；VEGF-A的高表達率分別為60.0%及61.1%，明顯高于對照組（P<0.01）。早期結直腸腫瘤中HMGB1的表達與VEGF-A表達之間呈正相關（rs=0.524，P<0.05）。蛋白印跡學檢查與上述結果一致。結論：

4、HMGB1在結直腸早期腫瘤組織中表達上調，可能具有促毛細血管生成的作用，而這種作用可能通過上調VEGF-A表達實現。
　　第二部分HMGB1及其受體對人臍靜脈內皮細胞VEGF-A表達的調控
　　目的：探討HMGB1及其受體RAGE、TLR2及TLR4對人臍靜脈內皮細胞VEGF-A表達的調控。方法：用不同濃度、不同持續(xù)時間的HMGB1蛋白刺激人內皮細胞，采用實時熒光定量聚合酶鏈反應（Real-time PCR）聯合酶聯免疫吸附

5、試驗（ELISA）分別從基因及蛋白水平觀察VEGF-A表達的變化；應用特異性小干擾RNA分別抑制HMGB1及其受體RAGE、TLR2及TLR4表達后，觀察VEGF-A表達的變化。結果：HMGB1蛋白對人內皮細胞VEGF-A mRNA和蛋白表達具有促進作用，且呈濃度及時間依賴性；抑制HMGB1及RAGE表達后內皮細胞VEGF-A的表達水平明顯低于對照組（P<0.05）；抑制TLR2及TLR4表達后VEGF-A的表達水平明顯高于對照組（P<