嚴重損傷后高遷移率族蛋白B1的改變及其與多器官損害的關系.pdf

1、目的：高遷移率族蛋白B1(HMGB1)作為一種晚期炎癥介質(zhì)，介導了膿毒癥和其他系統(tǒng)性炎癥的致死性效應。本試驗擬應用重度燙傷延遲復蘇動物模型，明確HMGB1 在嚴重燙傷中的表達變化規(guī)律，進而闡明HMGB1 對多器官損害的影響并對其機制進行初步探討。觀察丙酮酸乙酯（EP）與中藥血必凈治療對重度燙傷延遲復蘇動物HMGB1 表達影響及臟器損害的保護作用。旨在為嚴重損傷后機體膿毒癥及多器官功能障礙綜合征的預防和治療提供新思路。 方法：采

2、用30％TBSAШ度燙傷后延遲6小時（h）復蘇大鼠模型。雄性Wistar大鼠114只，隨機分為：①正常對照組（n=6），麻醉后活殺；②假燙傷組（n=18），在假燙傷后6h 腹腔內(nèi)注入生理鹽水（40 ml/kg），8、24、72h活殺，無菌取血及組織標本，各時間點均為6只動物；③燙傷組（n=30），在燙傷后2、12、24、36、48、60h分別給予3ml/次林格氏液腹腔內(nèi)注射腹腔內(nèi)注射，在相應時間點活殺；④EP液（3.23mg/ml）治療

3、組（n=30），于燙傷后2、12、24、36、48、60h分別給予3ml/次EP液腹腔內(nèi)注射治療，在相應時間點活殺。⑤血必凈治療組（n=30），在燙傷后2、12、24、36、48、60h分別給予血必凈注射液（4ml/kg）靜脈注射治療，在相應時間點活殺。無菌留取血及組織標本。后3組分別在燙傷后6h腹腔內(nèi)注入生理鹽水（40ml/kg）抗休克治療，活殺點分別為8、24、72h，每個時間點10只動物。另設實驗組研究EP與中藥血必凈治療對燙傷大

4、鼠生存時間的影響，觀察不同時間點給藥后各組動物7天的死亡率。采用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應檢測組織HMGB1與TNF-α的基因表達；蛋白免疫印記法（Western blot）及免疫組化法（Immunohistochemistry）檢測組織HMGB1 蛋白的含量；酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）分析組織TNF-α蛋白含量；全自動生化分析儀測定血清ALT、AST、BUN和Cr含量；肺組織髓過氧化物酶（MPO）活性采用酶學分光光度法測定；小腸組織

5、二胺氧化酶（DAO）活性采用分光光度法測定；采用HE染色觀察組織病理學變化。 結果： 1．正常大鼠肝、肺、腎組織均可表達一定量HMGB1 mRNA，燙傷延遲復蘇后8h肝、肺、腎組織HMGB1 mRNA表達顯著增高，傷后24h各組織HMGB1 mRNA 表達達峰值，并可持續(xù)至傷后72h。肝組織與肺組織的HMGB1蛋白水平變化與HMGB1 mRNA表達情況基本一致；腎組織HMGB1蛋白僅在燙傷延遲復蘇后24h表達顯著增加

6、。EP治療可顯著降低8h、24h及72h肝、肺、腎組織的HMGB1 mRNA/蛋白表達。中藥血必凈治療亦可顯著降低24h及72h的肝、肺、腎組織的HMGB1 mRNA表達。血必凈治療可有效降低24h及72h的肝、肺組織的HMGB1蛋白的表達，亦明顯降低了24h腎組織的HMGB1蛋白的含量。 2．燙傷延遲復蘇后8h，組織TNF-α mRNA/蛋白表達迅速升高，24小時基本恢復至傷前范圍；肝、肺組織TNF-α mRNA/蛋白水平于

7、傷后72小時不同程度再度升高，肝、肺組織TNF-α mRNA/蛋白表達于8h和72h呈雙峰樣增高；腎組織TNF-α mRNA/蛋白水平于8h和24h 顯著升高。EP治療可不同程度地抑制燙傷延遲復蘇后肝、肺組織8h及72h的TNF-α mRNA/蛋白表達，亦明顯降低腎組織傷后8h和24h的TNF-α mRNA/蛋白上調(diào)。血必凈治療抑制了燙傷延遲復蘇后72h肝組織TNF-α mRNA表達，顯著降低肝組織傷后8h及72h的TNF-α蛋白含量。

8、同時，肺組織8h和72h的TNF-α mRNA表達顯著降低，72h肺組織的TNF-α蛋白表達亦明顯受到抑制；此外，對腎組織TNF-α mRNA/蛋白表達的下調(diào)作用僅在燙傷延遲復蘇后24h。 3．燙傷延遲復蘇大鼠血清ALT、AST和BUN、Cr水平均呈現(xiàn)不同程度地升高；其中血清ALT、AST和Cr在24h達峰值，血清AST值可持續(xù)升高至72h，血清Cr雖然升高較晚，但是可持續(xù)時間較長，72h仍顯著升高。肺組織MPO活性于燙傷延遲

9、復蘇后8h顯著升高，24h達高峰，72h下降至接近正常水平。腸組織DAO活性在燙傷延遲復蘇后8h~24h持續(xù)降低。EP治療可顯著降低燙傷延遲復蘇大鼠血清ALT、AST在各個時間點的水平，可明顯降低24h血清Cr及8h、24h血清BUN的含量。血必凈治療可有效降低延遲復蘇大鼠血清ALT、AST在各個時間點的水平（除傷后8h血清AST），能明顯降低24h、72h血清Cr含量及24h BUN的含量。EP治療能顯著降低燙傷延遲復蘇大鼠術后8h、

10、24h肺組織MPO活性；亦能明顯升高傷后8h~24h小腸DAO活性。此外，血必凈治療可以顯著降低燙傷延遲復蘇大鼠術后24h肺組織MPO活性，并升高傷后8h~24h小腸組織DAO活性。 4．燙傷延遲復蘇大鼠肝、肺、腎組織在各個時間點均表現(xiàn)炎細胞侵潤，形態(tài)結構破壞明顯。EP與血必凈治療對于燙傷延遲復蘇大鼠的肝、肺、腎組織炎癥病變均有改善，其病理損傷程度明顯減輕。 5．EP和血必凈注射液治療均可顯著降低嚴重燙傷延遲復蘇大鼠的

11、死亡率。與燙傷組相比，EP治療組動物的總死亡率顯著降低（P<0.01）。與燙傷組相比，血必凈治療組動物的總死亡率亦顯著降低（P<0.05）。 結論： 1. 燙傷延遲復蘇可以促進HMGB1基因表達與合成釋放，其動力學變化規(guī)律表現(xiàn)為HMGB1產(chǎn)生較晚、下降緩慢的“晚期炎癥介質(zhì)”特點。HMGB1在誘導嚴重燙傷動物過度的炎癥反應與多器官功能損害中具有重要作用。 2. 組織TNF-α表達上調(diào)可能有介導產(chǎn)生HMGB1的效應