外源性高遷移率族蛋白B1對(duì)大鼠Ⅲ度燙傷早期創(chuàng)面缺血區(qū)血管生成的影響.pdf

1、目的：觀察外源性高遷移率族蛋白B1(HMGB1)在大鼠背部皮膚Ⅲ度燙傷早期創(chuàng)面缺血區(qū)中對(duì)血管生成的影響。
　　方法：取SD雄性大鼠36只，按隨機(jī)數(shù)字表法將大鼠分為單純燙傷組和HMGB1組，每組各18只。所有大鼠予以20g/L戊巴比妥3mg/kg腹腔注射麻醉，8％硫化鈉水溶液背部脫毛24h后，再次使用同前方法麻醉，將定制銅質(zhì)梳狀燙傷模型100℃沸水中煮3-5min后，置于大鼠背部已脫毛處，與大鼠背部皮膚組織完全貼合，等待20s后拿開(kāi)

2、，以制備含4個(gè)10*20mmⅢ°燙傷區(qū)域及3個(gè)5*20mm缺血區(qū)域的梳狀燙傷創(chuàng)面模型。HMGB1組大鼠燙傷后立即于創(chuàng)面缺血區(qū)周圍向缺血區(qū)皮下注射溶于0.1ml磷酸鹽緩沖液(PBS)的HMGB1400ng，單純燙傷組大鼠創(chuàng)面同樣部位皮下注射等量PBS。兩組大鼠干預(yù)處理后分別于第24、48、72h取材（每時(shí)間點(diǎn)每組各6只大鼠）并分別保存于中性甲醛溶液和RNA常溫保存液中。采用蘇木精-伊紅染色法(HE染色)方法通過(guò)觀察缺血區(qū)組織形態(tài)的變化來(lái)驗(yàn)

3、證燙傷創(chuàng)面缺血區(qū)模型制備成功;采用生物素-鏈霉親和素-過(guò)氧化物酶(SP)免疫組織化學(xué)法檢測(cè)缺血區(qū)組織中第24、48、72h血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)及第48、72h血小板-內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子(CD31)的蛋白表達(dá)量，比較兩組缺血區(qū)組織中第48、72h的微血管數(shù)量;采用熒光定量反轉(zhuǎn)錄—聚合酶連反應(yīng)比較兩組燙傷創(chuàng)面缺血區(qū)組織中24、48、72h的VEGF、CD31mRNA表達(dá)量。對(duì)所獲得數(shù)據(jù)進(jìn)行析因方差分析，組間比較行t檢驗(yàn)并使用Bonfe

4、rroni校正，P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：(1)免疫組化染色結(jié)果顯示在大鼠背部皮膚組織燙傷后缺血區(qū)中第24、48、72h HMGB1組的VEGF蛋白含量（分別為0.100±0.007、0.318±0.034、0.572±0.067）均高于單純燙傷組(分別為0.053±0.001、0.122±0.008、0.247±0.080)(t值為4.437～7.496，P＜0.05或P＜0.01);第48、72h HMGB

5、1組燙傷創(chuàng)面缺血區(qū)的CD31蛋白含量（分別為0.039±0.008、0.058±0.001）均高于單純燙傷組(分別為0.013±0.005、0.030±0.004)(t值分別為10.257、15.055，P值均小于0.01);(2)微血管計(jì)數(shù)結(jié)果顯示燙傷后缺血區(qū)組織第48、72h HMGB1組微血管數(shù)量(分別為2.333±0.408、5.000±0.408)多于單純燙傷組（分別為1.667±0.408、2.333±0.408）（t值分別

6、為3.536、4，P值均小于0.05）;(3)實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示在大鼠背部皮膚組織燙傷創(chuàng)面缺血區(qū)中第24、48、72hHMGB1組的VEGF mRNA表達(dá)量（分別為4.38±1.12、2.37±0.49、2.37±0.56）均高于單純燙傷組（分別為1.08±0.54、1.04±0.35、1.07±0.37）(t值為3.356～4.406，P值均小于0.05)，第24、48hHMGB1組缺血區(qū)的CD31mRNA表達(dá)量（分別為1.0

7、1±0.13、1.01±0.21）均高于單純燙傷組（分別為2.13±0.53、2.92±1.08）（t值分別為3.466、4.113，P值均小于0.05），第72hHMGB1組的CD31mRNA表達(dá)量（1.24±0.98）與單純燙傷組（1.23±0.26）相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t值為0.01，P值＞0.05）。
　　結(jié)論：1、外源性HMGB1在大鼠皮膚燙傷早期創(chuàng)面缺血區(qū)中具有促進(jìn)新生血管生成的作用;2、外源性HMGB1在燙傷早期創(chuàng)