矽肺發(fā)生發(fā)展過(guò)程中CTGF和KL-6變化規(guī)律研究.pdf

1、目的：探討CTGF和KL-6在整個(gè)矽肺病的進(jìn)程中的改變規(guī)律和其在這個(gè)進(jìn)程中所起的效用，為矽肺病的初期診治判斷及效果評(píng)價(jià)給予一定的理論上的支撐。
　　方法：⑴SPF干凈級(jí)的Wistar的雄性的大鼠84只，將其任意平均分配成兩個(gè)組為染塵實(shí)驗(yàn)組及生理鹽水對(duì)照組。運(yùn)用非氣管暴露法向氣管內(nèi)注入SiO2懸浮液來(lái)給大鼠進(jìn)行染塵，以此建立矽肺模型。按照不同的時(shí)間點(diǎn)分為7、14、21、28、60、90d這六個(gè)組，每組取7只處死，取其肺部組織來(lái)做HE

2、染色及免疫組化分析，觀摩其病理學(xué)上的改變以及CTGF和KL-6在肺部組織之中的表達(dá)位置及數(shù)量多少的情況，將一部分的肺組織做成一定量的勻漿并用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)得Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白含量來(lái)確定建模是否成功;同時(shí)收集支氣管肺泡灌洗液(BALF)及血清，采用(EHSA)測(cè)量CTGF及KL-6的含量;運(yùn)用原子吸收光譜法測(cè)得各個(gè)時(shí)相的染矽塵大鼠的血清中硅元素的濃度。⑵選取山東某金礦研究對(duì)象共180人，其中矽肺Ⅰ、Ⅱ期患者、接塵但無(wú)矽肺臨床表現(xiàn)的工人各4

3、0名分別為矽肺Ⅰ、Ⅱ期組、接塵組，及矽肺Ⅲ期患者21名為矽肺Ⅲ期組，另選39名與其他各組在各方面均衡可比的地面后勤人員作為對(duì)照組。研究對(duì)象所離心的血清中CTGF和KL廣6的質(zhì)量濃度用ELISA測(cè)量;計(jì)算每個(gè)分組的工人的累計(jì)粉塵接觸量(CTE)來(lái)探討各個(gè)期別中CTE與CTGF和KL-6含量之間的相關(guān)性關(guān)系。⑶運(yùn)用原子吸收光譜法測(cè)量染矽塵大鼠各時(shí)間點(diǎn)血清及肺組織勻漿中硅元素的含量，并做相關(guān)性分析;測(cè)量不同期別矽肺患者血清中硅元素的濃度，分析

4、各期別內(nèi)硅元素與CTGF、KL-6的相關(guān)性。
　　結(jié)果：①BALF和血清中的CTGF質(zhì)量濃度在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)相比較生理鹽水對(duì)照組而言，均有不同程度上的升高跡象，且呈現(xiàn)出一種先增后降態(tài)勢(shì)，在統(tǒng)計(jì)學(xué)水平上的差別是有意義的(P＜0.05)。BALF和血清中KL-6在各時(shí)間點(diǎn)相比較生理鹽水對(duì)照組均有不同程度的上升，隨時(shí)間延長(zhǎng)呈不斷增加趨勢(shì)，在統(tǒng)計(jì)學(xué)水平上的差別是有意義的（P＜0.05）。②對(duì)照組的肺組織用肉眼可以觀察到肺臟的質(zhì)地比較柔軟，顏色

5、正常并且紅潤(rùn)，富有彈性，HE染色光鏡之下觀測(cè)到肺部組織及肺泡的內(nèi)部結(jié)構(gòu)是完整的沒(méi)有被破壞，并伴隨著一些炎性癥狀的反應(yīng);7天的時(shí)候肺泡與肺泡之間的距離變長(zhǎng)，間距增寬，這時(shí)候就會(huì)看到數(shù)量龐多的巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞在各個(gè)肺泡的腔內(nèi)大量的聚集在一起并浸入腔內(nèi);28天的時(shí)候肺泡腔大部分基本消失，支氣管內(nèi)壁增厚，炎性細(xì)胞主要為淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞，偶見(jiàn)成纖維細(xì)胞;90天的時(shí)候肺泡腔結(jié)構(gòu)模糊不清，形態(tài)變異，成纖維細(xì)胞大量出現(xiàn)，呈現(xiàn)出明顯的纖維化。③矽肺大

6、鼠肺組織中CTGF陽(yáng)性信號(hào)區(qū)域是在細(xì)胞質(zhì)上，與對(duì)照組相比，C TGF蛋白在各實(shí)驗(yàn)組的表達(dá)均增高，且在統(tǒng)計(jì)學(xué)水平上的差別是有意義的(F=4.006，P＜0.05)，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，呈先增后降趨勢(shì)，14d、21d和28d在統(tǒng)計(jì)學(xué)水平上的差別是有意義的(P＜0.05)。④與對(duì)照組比，呈先增后減的趨勢(shì)，Ⅱ期矽肺患者血清中CTGF的濃度達(dá)到高峰，但均高于對(duì)照組，與對(duì)照組比，Ⅱ期、矽肺患者差異較明顯，且均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05），與接塵工人比，

7、Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期矽肺患者差異明顯且都無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）;與對(duì)照組比，不同期別患者血清中KL-6濃度的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=11.839，P＜0.05)，大體隨著期別變化呈上升趨勢(shì)，矽肺Ⅱ期、Ⅲ期的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;與接塵組相比，矽肺Ⅱ期、Ⅲ期的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）。⑤對(duì)照組、接塵組、矽肺Ⅰ期組、矽肺Ⅱ期組和矽肺Ⅲ組分別依據(jù)累積接塵量(CTE)進(jìn)行分層，把CTE與血清中的CTGF和KL-6含量進(jìn)行相關(guān)

8、性分析，發(fā)現(xiàn)其與這兩個(gè)因子皆無(wú)相關(guān)性（P＞0.05）。⑥在染矽塵大鼠血硅質(zhì)量濃度在染矽塵時(shí)間變得越來(lái)越久而呈現(xiàn)下降態(tài)勢(shì)，并且都要高于生理鹽水對(duì)照組(P＜0.05);人群血清中硅元素含量在病例組也呈現(xiàn)一種下降趨勢(shì)，且均高于對(duì)照組和接塵組(P＜0.05）;染矽塵大鼠血清中硅元素與CTGF和KL-6的含量進(jìn)行相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)與CTGF濃度存在正相關(guān)關(guān)系(r=0.507，P＜0.05)，與KL-6存在一種負(fù)相關(guān)關(guān)系(r-0.313，P＜0.05

9、)，且血清與肺組織勻漿中硅元素含量之間存在正相關(guān)關(guān)系(r=0.696，P＜0.05);人群流行病學(xué)調(diào)查中將各組人群按血硅濃度的不同進(jìn)行分層，然后與血清中CTGF和KL-6濃度進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在矽肺Ⅱ期組內(nèi)血清硅元素的含量與二者濃度之間存在相關(guān)關(guān)系(rCT GF=-0.428，PCT GF＜0.05;rKL-6=-0.550，PKL-6＜0.05)，接塵組和其他病例組不存在這樣的相關(guān)(P＞0.05）。
　　結(jié)論：⑴染矽塵大鼠

10、BALF、血清及肺組織中CTGF和KL-6的變化趨勢(shì)基本一致，與肺組織病理變化及免疫組化染色結(jié)果一致，說(shuō)明CTGF、KL-6在矽肺病整個(gè)進(jìn)程之中扮演著重要的角色。⑵不同期別矽肺患者血清中CTGF、KL-6濃度改變是一種在能夠很好的指標(biāo)，且CTGF、KL-6含量與累計(jì)接塵量不存在相關(guān)性，說(shuō)明可能是累積粉塵接觸量作為外暴露存在濃度不穩(wěn)定，個(gè)體差異導(dǎo)致實(shí)際吸入量不均勻等。⑶硅元素在染塵大鼠及不同期別患者血清中的含量變化提示其作為矽塵內(nèi)暴露的可