乳腺癌耐藥細(xì)胞中miR-217、miR-375的功能研究.pdf

1、目的：通過(guò)高通量測(cè)序分析，篩選出人乳腺癌耐阿霉素細(xì)胞與野生型的乳腺癌細(xì)胞中差異表達(dá)的miRNAs,研究乳腺癌耐阿霉素細(xì)胞中低表達(dá)的miRNA-375和高表達(dá)的miRNA-217對(duì)人乳腺癌耐阿霉素細(xì)胞增殖以及侵襲、遷移能力的影響。
　　方法：通過(guò)WST-1實(shí)驗(yàn)先驗(yàn)證得到的乳腺癌耐藥細(xì)胞是否為穩(wěn)定的耐藥細(xì)胞。通過(guò)對(duì)野生型乳腺癌細(xì)胞和耐阿霉素的乳腺癌細(xì)胞的樣品進(jìn)行Small RNA高通量測(cè)序分析，獲取正常乳腺癌細(xì)胞和耐阿霉素的乳腺癌細(xì)胞

2、差異表達(dá)miRNA信息；選擇一些差異表達(dá)的miRNA，用Real-time RT-PCR實(shí)驗(yàn)對(duì)篩選出差異表達(dá)顯著的miRNA進(jìn)行驗(yàn)證。將miR-217 inhibitor和inhibitor NC、miR-375模擬物（miR-375mimics）和mimics NC分別轉(zhuǎn)染MCF-7/Adr；阿霉素處理后用WST-1法檢測(cè)耐阿霉素細(xì)胞的增殖情況；流式細(xì)胞儀檢測(cè)MCF-7/Adr細(xì)胞周期和凋亡；細(xì)胞劃痕和transwell遷移、侵襲實(shí)驗(yàn)

3、檢測(cè)MCF-7/Adr細(xì)胞的遷移和侵襲能力。
　　結(jié)果：
　　1、通過(guò)WST-1實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證得到的乳腺癌耐藥細(xì)胞為穩(wěn)定的耐藥細(xì)胞，對(duì)不同藥物濃度的阿霉素，耐藥的乳腺癌細(xì)胞比野生型的乳腺癌細(xì)胞有更明顯的耐受性。
　　2、高通量測(cè)序結(jié)果顯示：與配對(duì)的野生型的乳腺癌細(xì)胞相比，有多個(gè)miRNAs在耐阿霉素的乳腺癌細(xì)胞中表達(dá)異常。
　　3、Real-time RT-PCR結(jié)果顯示：miR-375在耐阿霉素的乳腺癌細(xì)胞中表達(dá)顯著

4、降低，miR-217在耐阿霉素的乳腺癌細(xì)胞中表達(dá)顯著提高。
　　4、WST-1實(shí)驗(yàn)顯示在乳腺癌耐藥（MCF-7/adr）細(xì)胞中分別轉(zhuǎn)染高表達(dá)的miR-217、陰性對(duì)照組inhibitor NC和低表達(dá)的miR-375、模擬物對(duì)照組mimics NC，發(fā)現(xiàn)表達(dá)72h后，與對(duì)照組相比轉(zhuǎn)染小分子的乳腺癌耐藥細(xì)胞的生長(zhǎng)速度均明顯減慢。
　　5、流式細(xì)胞儀測(cè)細(xì)胞周期、凋亡結(jié)果顯示：上調(diào)miR-375和下調(diào)miR-217的表達(dá)后，可以提

5、高M(jìn)CF-7/Adr細(xì)胞對(duì)阿霉素的敏感性并促進(jìn)其凋亡；可以將MCF-7/Adr細(xì)胞周期阻滯在G1期。
　　6、Tranwell遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：上調(diào)miR-375和下調(diào)miR-217的表達(dá)均可以使乳腺癌耐阿霉素細(xì)胞的遷移能力降低。
　　7、Tranwell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：上調(diào)miR-375和下調(diào)miR-217的表達(dá)均可以使乳腺癌耐阿霉素細(xì)胞的侵襲能力降低。
　　8、細(xì)胞劃痕結(jié)果顯示：上調(diào)miR-375和下調(diào)miR-2