馬皰疹病毒Ⅰ型TK基因啟動子的定位及特點的研究.pdf

1、馬皰疹病毒1型(Equine Herpes Virus1，EHV-1)屬于α-皰疹病毒，主要感染馬屬動物，引起以呼吸道癥狀為主并伴隨著發(fā)燒、淋巴細胞增多或母馬妊娠晚期流產(chǎn)和死胎等癥狀的傳染病。EHV-1造成對機體的潛伏感染，當(dāng)機體免疫力降低時出現(xiàn)病毒血癥和神經(jīng)癥狀。胸腺激酶(Thymidine Kinase，TK)基因是EHV-1主要毒力基因，缺失TK基因影響皰疹病毒在神經(jīng)元中的復(fù)制能力。TK基因?qū)儆诓《镜脑缙诨?，其編碼產(chǎn)物胸苷激酶是

2、胸腺嘧啶合成補救途徑中所必需的酶。TK功能缺失的毒株在非分裂細胞中的復(fù)制能力非常低，使得神經(jīng)潛伏病毒的毒力難以恢復(fù)，因而在TK對神經(jīng)致病性的研究中具有特殊意義。UL24為EHV-1的早期基因，缺失UL24同樣影響病毒在神經(jīng)細胞中的生長。已有研究證明皰疹病毒TK基因啟動子位于UL24基因內(nèi)部，但并未確定TK啟動子的確定區(qū)域。
　　 本實驗根據(jù)已知的皰疹病毒TK基因啟動子基因特性預(yù)測EHV-1 TK啟動子區(qū)域，并輔助軟件分析，預(yù)測可

3、能的啟動區(qū)域與調(diào)控元件?；陬A(yù)測結(jié)果在TK基因上游序列設(shè)計克隆出5條不同長度的基因片段，同時構(gòu)建不含啟動子區(qū)域的GFP載體，將上述TK基因上游片段亞克隆到GFP的5'UTR區(qū)域，構(gòu)建啟動子活性預(yù)測系統(tǒng);對已構(gòu)建載完成的5種啟動子檢測系統(tǒng)體進行細胞轉(zhuǎn)染，用熒光顯微鏡與流式細胞儀進行GFP表達檢測;根據(jù)已知預(yù)測片段的啟動活性的結(jié)果，用軟件Bioinformatics and Molecular Analysis Section進行調(diào)控元件對

4、比分析。結(jié)論:確定3個區(qū)域具有啟動子活性，分別位于UL24基因3'端-266～+814、-100～-1、-49～-1區(qū)域，同時-266～+814區(qū)域的啟動活性強于-100～-1區(qū)域，-100～-1區(qū)域與-49～-1區(qū)域啟動活性相同;2個不具有啟動子活性區(qū)域，分別位于UL24基因3'端1～998和5'端958～1045區(qū)域，預(yù)測UL24基因3'端1～998區(qū)域可能具有未知的轉(zhuǎn)錄調(diào)控抑制元件;EHV-1的TK基因調(diào)控原元件中，TATAA和G