向小鼠導(dǎo)入α-1，3-GT沉默基因及其整合效果的研究.pdf

1、為了沉默α-1,3-半乳糖苷轉(zhuǎn)移酶，在己報道的shRNA序列前加上人類H1啟動子，設(shè)計一段沉默小鼠α-1,3-GT基因的siRNA序列。針對該序列分段設(shè)計引物，完全采用PCR法將其連接起來，再把該序列克隆到pGEM-T載體中，構(gòu)建出針對小鼠α-1,3-GT基因的特異性沉默載體。將其酶切線性化后通過顯微注射法導(dǎo)入小鼠受精卵中，然后進(jìn)行胚胎移植。最后利用PCR和Southern blot對出生仔鼠進(jìn)行了外源基因的整合檢測。該研究為獲得α-1

2、,3-GT基因沉默小鼠，構(gòu)建異種器官移植用小鼠模型奠定了重要基礎(chǔ)。 1、經(jīng)PCR法和測序驗證，已經(jīng)順利用兩步PCR法將設(shè)計的引物連接起來，并成功的克隆進(jìn)入pGEM-T載體中。 2、利用顯微注射法將線性化的α-1,3-GT基因沉默載體導(dǎo)入2846枚小鼠受精卵中，得到可移胚2291枚，將其移入76只受體母鼠，其中有35只母鼠妊娠，妊娠率為46.1％。在母鼠妊娠過程中，前后有29只母鼠流產(chǎn)，未流產(chǎn)的6只妊娠小鼠產(chǎn)仔21只。