TREM-2在腹腔感染膿毒癥的作用研究.pdf

1、目的：探討腹腔感染性膿毒癥中TREM-2（髓樣細(xì)胞觸發(fā)受體）與Janus激酶-信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子（JAK/STAT）通路的關(guān)系。
　　方法：實(shí)驗(yàn)對(duì)象為雄性清潔級(jí)Wistar大鼠，體重304±11g。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)分為兩部分：第一部分為腹腔感染性膿毒癥大鼠模型的建立。將80只大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組（n=8）、假手術(shù)組（n=32）、模型組（CLP組，n=40），模型組采用盲腸結(jié)扎穿孔法[1]（Cecal ligation and punct

2、ure，CLP）制備腹腔感染性膿毒癥模型；對(duì)照組不作處理；假手術(shù)組僅麻醉和開(kāi)關(guān)腹腔，不行手術(shù)處理。記錄72h死亡情況，采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)血清、腹引液白細(xì)胞介素（IL）-1、IL-4、IL-6、IL-10濃度變化。第二部分為應(yīng)用JAK2抑制劑AG490和STAT抑制劑雷帕霉素(RPM)干預(yù)后，觀察肝組織TREM-2表達(dá)情況：分為假手術(shù)組（n=24）、CLP組（n=48）、AG490組（n=48）和RPM組（n=

3、48），后2組分別于CLP前0.5h皮下注射AG4908 mg/kg、RPM0.4mg/kg，各組于術(shù)后6、24、48、72h從內(nèi)眥靜脈取靜脈血0.3ml后處死動(dòng)物，留取血清、腹引液及肝組織標(biāo)本備用。采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)血清、腹引液白細(xì)胞介素（IL）-1、IL-4、IL-6、IL-10濃度變化；采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測(cè)肝組織TREM-2 mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　第一部分

4、：對(duì)照組和假手術(shù)組大鼠隨時(shí)間進(jìn)展生命體征及腹部解剖無(wú)明顯改變。CLP組大鼠術(shù)后72h腹部探查可見(jiàn)多臟器淤血、粘連，回腸組織明顯腫脹，腹腔滲液增多伴惡臭等炎性改變。建模后72h，血液和腹引液中，CLP組IL-1、IL-6和IL-4、IL-10較對(duì)照組和假手術(shù)組均明顯增加（P＜0.01），說(shuō)明腹腔感染性膿毒癥大鼠模型復(fù)制成功。
　　第二部分：（1）與假手術(shù)組相比，CLP組血清炎癥因子濃度6h即開(kāi)始升高，72h達(dá)高峰（P＜0.01）。應(yīng)

5、用AG490后，血清炎癥因子濃度6h即開(kāi)始升高，72h達(dá)高峰，較CLP組相比無(wú)差異；RPM組IL-1、IL-4、IL-10的濃度6h最高，隨時(shí)間逐漸降低，且顯著低于相同時(shí)間點(diǎn)CLP組，而6h IL-6的濃度雖較CLP組無(wú)差異，但24h、48h、72h IL-6的濃度較CLP組顯著降低（P＜0.01）。（2）與假手術(shù)組相比，CLP組腹引液炎癥因子濃度6h即開(kāi)始升高，72h達(dá)高峰（P＜0.01）。應(yīng)用AG490后，腹引液炎癥因子濃度6h即開(kāi)

6、始升高，72h達(dá)高峰，較CLP組相比無(wú)差異；RPM組，IL-4、IL-106h即達(dá)到峰值，隨時(shí)間推進(jìn)呈下降趨勢(shì)，與相同時(shí)間點(diǎn)CLP組相比有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，而6h IL-1、IL-6的濃度雖較CLP組無(wú)差異，但24h、48h、72h IL-1、IL-6的濃度較CLP組顯著降低（P＜0.01）。（3）RT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，CLP組肝組織TREM-2 mRNA的表達(dá)隨時(shí)間逐漸減低；AG490組肝組織TREM-2 mRNA的表達(dá)隨時(shí)間延長(zhǎng)呈降低

7、趨勢(shì)，較同時(shí)間點(diǎn)CLP組肝組織TREM-2 mRNA的表達(dá)無(wú)顯著性差異；RPM組肝組織TREM-2 mRNA的表達(dá)雖在6h較CLP組TREM-2 mRNA的表達(dá)減少，但在24、48、72h顯著高于同時(shí)間點(diǎn)CLP組TREM-2 mRNA的表達(dá)（P＜0.01）。
　　結(jié)論：
　　1．本實(shí)驗(yàn)證實(shí)腹腔感染性膿毒癥時(shí)大鼠肝組織TREM-2表達(dá)顯著降低，而血清及腹引液炎癥因子明顯升高，說(shuō)明TREM-2對(duì)炎癥反應(yīng)的級(jí)聯(lián)擴(kuò)大有限制作用，TR