TREM-2在腹腔感染膿毒癥的作用研究.pdf

1、目的：探討腹腔感染性膿毒癥中TREM-2（髓樣細胞觸發(fā)受體）與Janus激酶-信號轉(zhuǎn)導和轉(zhuǎn)錄激活因子（JAK/STAT）通路的關系。
　　方法：實驗對象為雄性清潔級Wistar大鼠，體重304±11g。實驗設計分為兩部分：第一部分為腹腔感染性膿毒癥大鼠模型的建立。將80只大鼠隨機分為對照組（n=8）、假手術組（n=32）、模型組（CLP組，n=40），模型組采用盲腸結(jié)扎穿孔法[1]（Cecal ligation and punct

2、ure，CLP）制備腹腔感染性膿毒癥模型；對照組不作處理；假手術組僅麻醉和開關腹腔，不行手術處理。記錄72h死亡情況，采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測血清、腹引液白細胞介素（IL）-1、IL-4、IL-6、IL-10濃度變化。第二部分為應用JAK2抑制劑AG490和STAT抑制劑雷帕霉素(RPM)干預后，觀察肝組織TREM-2表達情況：分為假手術組（n=24）、CLP組（n=48）、AG490組（n=48）和RPM組（n=

3、48），后2組分別于CLP前0.5h皮下注射AG4908 mg/kg、RPM0.4mg/kg，各組于術后6、24、48、72h從內(nèi)眥靜脈取靜脈血0.3ml后處死動物，留取血清、腹引液及肝組織標本備用。采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測血清、腹引液白細胞介素（IL）-1、IL-4、IL-6、IL-10濃度變化；采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應（RT-PCR）檢測肝組織TREM-2 mRNA的表達。
　　結(jié)果：
　　第一部分

4、：對照組和假手術組大鼠隨時間進展生命體征及腹部解剖無明顯改變。CLP組大鼠術后72h腹部探查可見多臟器淤血、粘連，回腸組織明顯腫脹，腹腔滲液增多伴惡臭等炎性改變。建模后72h，血液和腹引液中，CLP組IL-1、IL-6和IL-4、IL-10較對照組和假手術組均明顯增加（P＜0.01），說明腹腔感染性膿毒癥大鼠模型復制成功。
　　第二部分：（1）與假手術組相比，CLP組血清炎癥因子濃度6h即開始升高，72h達高峰（P＜0.01）。應

5、用AG490后，血清炎癥因子濃度6h即開始升高，72h達高峰，較CLP組相比無差異；RPM組IL-1、IL-4、IL-10的濃度6h最高，隨時間逐漸降低，且顯著低于相同時間點CLP組，而6h IL-6的濃度雖較CLP組無差異，但24h、48h、72h IL-6的濃度較CLP組顯著降低（P＜0.01）。（2）與假手術組相比，CLP組腹引液炎癥因子濃度6h即開始升高，72h達高峰（P＜0.01）。應用AG490后，腹引液炎癥因子濃度6h即開

6、始升高，72h達高峰，較CLP組相比無差異；RPM組，IL-4、IL-106h即達到峰值，隨時間推進呈下降趨勢，與相同時間點CLP組相比有明顯統(tǒng)計學差異，而6h IL-1、IL-6的濃度雖較CLP組無差異，但24h、48h、72h IL-1、IL-6的濃度較CLP組顯著降低（P＜0.01）。（3）RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)，CLP組肝組織TREM-2 mRNA的表達隨時間逐漸減低；AG490組肝組織TREM-2 mRNA的表達隨時間延長呈降低

7、趨勢，較同時間點CLP組肝組織TREM-2 mRNA的表達無顯著性差異；RPM組肝組織TREM-2 mRNA的表達雖在6h較CLP組TREM-2 mRNA的表達減少，但在24、48、72h顯著高于同時間點CLP組TREM-2 mRNA的表達（P＜0.01）。
　　結(jié)論：
　　1．本實驗證實腹腔感染性膿毒癥時大鼠肝組織TREM-2表達顯著降低，而血清及腹引液炎癥因子明顯升高，說明TREM-2對炎癥反應的級聯(lián)擴大有限制作用，TR