去鐵胺和阿加曲班減輕非張力性血腫對擴張皮瓣影響的實驗研究.pdf

1、研究背景與目的：皮膚軟組織擴張術已廣泛應用于臨床，成為整形外科常規(guī)治療手段之一，用于多種組織缺損的修復和器官再造。但是在擴張器植入術后經常會出現(xiàn)一些并發(fā)癥，如血腫、感染、皮瓣壞死等，其中血腫是最常見的。血腫不僅會對皮瓣產生壓迫使組織缺血，而且會對組織產生毒性作用。此外，血腫又與感染和皮瓣壞死密切相關。目前，臨床上對于擴張器植入術后血腫的治療僅限于清除血腫，尚無有效的減輕皮瓣損傷的治療藥物。本研究的目的是探討非張力性血腫引起擴張器表面皮瓣

2、損傷的機制，為減輕血腫造成的皮瓣損傷尋求有效的治療藥物，并探討其作用機理。本研究由兩部分組成： 第一部分 去鐵胺減輕非張力性血腫中鐵對未擴張皮瓣毒性作用的研究方法：13頭4-8月齡白色小型豬，在每頭豬脊柱兩側各設計5個術區(qū)，共128個術區(qū)，共植入128個80ml腎形擴張器，形成128個未擴張皮瓣。將未擴張皮瓣隨機分配進入對照組、血腫組、去鐵胺組、阿加曲班組，每組32個未擴張皮瓣。其中關于阿加曲班組的實驗內容將在論文第二部

3、分的實驗二中敘述。對照組：擴張器植入后不做其他處理；血腫組：在擴張器植入后向剝離腔隙內注入15ml自體血液；去鐵胺組：在擴張器植入后向剝離腔隙內注入15ml自體血液和270mg甲磺酸去鐵胺。各組分別在術后24h、72h、120h取材，每組共取材24個未擴張皮瓣。每組取材后剩余的8個擴張器于術后8天注水，注水完畢后取材。檢測各組擴張器植入術后2h皮瓣的血流情況，檢測未擴張皮瓣鐵含量、丙二醛(MDA)含量、髓過氧化物酶(MPO)活性、擴張皮

4、瓣包膜厚度、包膜膠原含量和擴張皮瓣即時回縮率。 結果：(1)三個組擴張器植入術后2h未擴張皮瓣血流灌注量無顯著差別(P>0.05)； (2)血腫組術后皮瓣鐵含量、MDA含量和MPO活性均高于對照組(P<0.01)；去鐵胺組皮瓣鐵含量和MDA含量低于血腫組(P<0.01)，MPO活性與血腫組無顯著差異(P>0.05)； (3)血腫組擴張皮瓣包膜厚度、包膜膠原含量和擴張皮瓣即時回縮率均高于對照組(P<0.01)，去鐵胺組與血腫組無顯

5、著差異(P>0.05)。 第二部分 阿加曲班減輕非張力性血腫中凝血酶對擴張皮瓣的影響及其機制的研究實驗一凝血酶對豬皮膚成纖維細胞增殖作用的研究方法：采用貼壁法進行豬皮膚成纖維細胞原代培養(yǎng)，并傳代、鑒定。用MTT法檢測不同濃度凝血酶刺激后的成纖維細胞活力。用氯胺T法檢測不同濃度凝血酶刺激后的細胞上清中羥脯氨酸含量。用免疫組化的方法檢測凝血酶刺激后的成纖維細胞中α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)的表達情況。在培養(yǎng)液中加入阿加曲

6、班后重復上述檢測。 結果：(1)培養(yǎng)的細胞為典型的成纖維細胞形態(tài)，波形蛋白單克隆抗體免疫組化染色呈陽性。(2)加入不同濃度凝血酶的各組吸光值均高于不加凝血酶組(A組)(P<0.01)，加入阿加曲班和凝血酶的各組吸光值與A組無顯著性差異(P>0.05)。(3)加入不同濃度凝血酶的各組細胞上清中羥脯氨酸含量均高于不加凝血酶組(A組)(P<0.01)，加入阿加曲班和凝血酶的各組上清中羥脯氨酸含量與A組相比無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。

7、(4)凝血酶刺激后的成纖維細胞中有α-SMA的表達，加入阿加曲班后此種表達被抑制。 實驗二阿加曲班減輕非張力性血腫中凝血酶對擴張皮瓣影響的研究方法：本實驗設計對照組、血腫組和阿加曲班組。其中對照組和血腫組的實驗設計與第一部分中的對照組和血腫組相同。阿加曲班組：在擴張器植入后向剝離腔隙內注入15ml血液和5001μg阿加曲班。各組分別在術后24h、72h、120h取材，每組取材后剩余的8個擴張器于術后8天注水，注水完畢后取材。檢測

8、未擴張皮瓣MPO活性、MDA含量、擴張皮瓣包膜厚度、包膜膠原含量和擴張皮瓣即時回縮率。用免疫組化的方法檢測未擴張皮瓣中細胞間粘附分子-1(ICAM-1)和擴張皮瓣中α-SMA的表達情況。 結果：(1)血腫組術后皮瓣MPO活性和ICAM-1的表達量均高于對照組(P<0.01)，阿加曲班組皮瓣MPO活性和ICAM-1的表達量均低于血腫組(P<0.01)：(2)血腫組術后72h和120h皮瓣MDA含量均高于對照組(P<0.01)，阿加

9、曲班組術后72h和120h皮瓣MDA含量低于血腫組(P<0.05)(3)血腫組擴張皮瓣包膜厚度、包膜膠原含量、擴張皮瓣中a-SMA的表達量、擴張皮瓣即時回縮率均高于對照組(P<0.05)，阿加曲班組的這些指標均低于血腫組(P<0.05)。 結論： 1.擴張器植入術后形成的非張力性血腫能使未擴張皮瓣脂質過氧化反應和炎癥反應增強。局部應用去鐵胺能減輕血腫造成的脂質過氧化反應，去鐵胺的這種作用主要是通過降低皮瓣中的鐵含量而實現(xiàn)

10、的。局部應用阿加曲班能減輕血腫造成的脂質過氧化反應和炎癥反應，阿加曲班的這種作用是通過抑制血腫中的凝血酶而實現(xiàn)的。 2.凝血酶能誘導成纖維細胞增殖、膠原分泌量增加，能刺激成纖維細胞表達α-SMA，使成纖維細胞轉變?yōu)榧〕衫w維細胞。阿加曲班能抑制凝血酶的這種作用。 3.非張力性血腫能使擴張皮瓣的纖維包膜增厚、包膜膠原含量增加、α-SMA表達增多、擴張皮瓣即時回縮率增加。局部應用去鐵胺不能減輕血腫的這種作用。局部應用阿加曲班能