丁香抑制低密度脂蛋白氧化和糖基化及其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的研究.pdf

1、動脈粥樣硬化(AS)嚴(yán)重危害人類健康，是心血管疾病中最主要的致死原因之一，而低密度脂蛋白(LDL)氧化和糖基化修飾均是導(dǎo)致動脈粥樣硬化(AS)的關(guān)鍵因素，因此尋找合適的方法抑制LDL氧化和糖基化修飾對防控AS具有重要意義?；诙∠阋种芁DL氧化和糖基化有效成分的未知性以及熒光檢測的高靈敏性，本研究以丁香的干燥花蕾為原料，分別構(gòu)建LDL-CuSO4氧化和LDL-葡萄糖糖基化孵育體系，采用生物活性追蹤法對丁香抗LDL氧化和糖基化進(jìn)行研究，以

2、明確其功能活性及對應(yīng)的有效部位;進(jìn)而采用高效液相色譜串聯(lián)四級桿飛行時間質(zhì)譜(HPLC-Q-TOF-MS/MS)技術(shù)對有效部位化學(xué)成分進(jìn)行了檢測和分析。主要結(jié)果如下:
　　1.LDL熒光特性變化的最佳測定時間為48h;5、10、15μg/mL丁香粗提物對LDL氧化修飾過程中色氨酸（Trp）熒光淬滅、熒光發(fā)色團(tuán)紅移、氧化產(chǎn)生的活性醛修飾apoB100所含賴氨酸(Lys)殘基變化、熒光物質(zhì)和脂褐素產(chǎn)生及三維熒光的變化均具有較好的抑制作用

3、，且抑制作用與粗提物濃度正相關(guān);10μg/mL正己烷相對Trp熒光淬滅、熒光發(fā)色團(tuán)紅移及三維熒光變化的抑制作用最強(qiáng)，而10μg/mL乙酸乙酯相抑制活性醛修飾Lys殘基、熒光物質(zhì)和脂褐素的產(chǎn)生效果最好。
　　2.50、100、200μg/mL丁香粗提物對LDL糖基化修飾過程中產(chǎn)生的早期產(chǎn)物(Amadori產(chǎn)物)、中期產(chǎn)物（二羰基化合物）及終末期產(chǎn)物(AGEs)均具有較好的抑制效果，且抑制效果與其濃度正相關(guān);不同極性成分中乙酸乙酯相抑

4、制LDL糖基化修飾能力最強(qiáng)，其中200μg/mL的丁香乙酸乙酯相能顯著減少Amadori產(chǎn)物的產(chǎn)生;50、100μg/mL的乙酸乙酯相均能顯著抑制二羰基化合物的生成，其抑制功效與濃度成正比;100、200μg/mL的乙酸乙酯相均能顯著抑制AGEs的產(chǎn)生，其糖基化抑制率分別高達(dá)46.75％、61.45％。
　　3.依據(jù)質(zhì)譜裂解規(guī)律及文獻(xiàn)資料，在負(fù)離子模式下，從丁香乙酸乙酯相樣品中共分析檢測出12種化合物。它們分別為5-羥甲基糠醛、沒

5、食子酸、香草酸、2-O-(6'-O-沒食子?；?-β-D-葡萄糖基苯甲酸甲酯、對-羥基-反式肉桂酸、對羥基苯乙酮、eugenol4-O-β-D-(6'-O-galloyl)glucopyranoside、鼠李秦素-3-O-β-D-葡萄糖苷、阿魏醛、木犀草素、槲皮素和3，5，3'，4'-四羥基-7-甲氧基黃酮。
　　上述結(jié)果表明，丁香對LDL氧化修飾過程中熒光特性的變化具有較好的抑制作用，起抑制作用的主要物質(zhì)集中在乙酸乙酯相和正己烷