大鼠腎上腺細(xì)胞體外培養(yǎng)觀察及鑒定.pdf

1、目的:原代培養(yǎng)大鼠腎上腺細(xì)胞,動態(tài)觀察離體條件下腎上腺細(xì)胞的生長情況和分泌特性,為尋找到腎上腺細(xì)胞的最佳細(xì)胞移植時限提供實驗依據(jù)。
　　 方法:選用雄性2周齡Wistar大鼠,無菌條件下切取雙側(cè)腎上腺,體外分離腎上腺皮質(zhì),用含20％胎牛血清(FBS)的DMEM培養(yǎng)基原代培養(yǎng)。倒置相差顯微鏡下觀察不同培養(yǎng)時間腎上腺細(xì)胞的生長過程及其形態(tài)變化,臺盼蘭染色檢測腎上腺細(xì)胞的存活率；分別取不同培養(yǎng)時間點的各組腎上腺細(xì)胞培養(yǎng)液,酶聯(lián)免疫分析

2、法測定皮質(zhì)酮濃度,放射免疫分析法測定皮質(zhì)醇和醛固酮濃度。
　　 結(jié)果:正常大鼠腎上腺細(xì)胞體外原代培養(yǎng)48小時后,在顯微鏡下觀察,可見腎上腺細(xì)胞貼壁生長,細(xì)胞體積增大,胞體呈圓形或多角形,胞體大,胞漿透亮,胞漿內(nèi)有許多大小較為規(guī)則的顆粒。4天后生長旺盛,數(shù)量增多,細(xì)胞鋪滿培養(yǎng)板,細(xì)胞成活率達95.94％。隨著培養(yǎng)時間的延長,細(xì)胞逐漸變?yōu)榕炙笮?胞漿內(nèi)顆粒逐漸減少。2周后細(xì)胞出現(xiàn)皺縮和破碎,開始衰老。
　　 體外培養(yǎng)的腎上腺