BMI指數(shù)與大鼠ALI模型的肺損傷程度相關(guān)性研究.pdf

1、目的：
　　了解不同級(jí)別肺損傷動(dòng)物模型肺組織病理學(xué)評(píng)分及W/D差異；了解不同級(jí)別肺損傷動(dòng)物模型外周血炎癥因子TNF-α、IL-1β水平表達(dá)變化及其差異基本規(guī)律；了解不同級(jí)別肺損傷動(dòng)物模型外肺組織中NF-κBp65 mRNA水平，NF-κB p65核轉(zhuǎn)位比率三指標(biāo)共同評(píng)價(jià)BMI導(dǎo)致表達(dá)的差異規(guī)律；通過(guò)W/D、肺損傷病理評(píng)分、TNF-α、IL-1β、NF-κBp65五個(gè)指標(biāo)聯(lián)合評(píng)價(jià)肺損傷程度，并將BMI指數(shù)與肺損傷程度作相關(guān)性分析，期

2、望證實(shí)BMI指數(shù)是發(fā)生ALI的獨(dú)立危險(xiǎn)因子；通過(guò)分析不同BMI指數(shù)組Angptl2 mRNA與蛋白水平，從Angptl2是肥胖的關(guān)鍵性脂源性炎癥因子角度出發(fā)，探討B(tài)MI與ALI相關(guān)性的可能機(jī)制通路。
　　方法：
　　健康雄性SD大鼠36只，體質(zhì)量(168±31)g，由重慶醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，按完全隨機(jī)原則分為4組(n=9)，C組(空白對(duì)照組)、OA組(普通大鼠OA造模組)采用普通飼料喂養(yǎng)，C-H組(高脂肥胖對(duì)照組)、O

3、-H組(高脂肥胖油酸造模組)采用高脂飼料(20％豬油，10％奶粉，10％雞蛋，60％普通飼料)誘導(dǎo)肥胖模型。8周后測(cè)量體重指數(shù)BMI(Kg/m2)及血脂水平(mmol/L)。C組、C-H組采用尾靜脈注射生理鹽水作對(duì)照組，OA、O-H兩組采用尾靜脈注射油酸復(fù)制肺損傷模型，各組劑量均為0.1ml/kg，造模后4h通過(guò)觀察造模后大鼠的呼吸頻率、皮膚粘膜顏色、活動(dòng)行為初步判斷造模成功與否，采用3.5％水合氯醛充分麻醉大鼠(10ml/kg)，頸靜

4、脈取血分離血漿備用；開(kāi)胸后肉眼觀察肺組織出血、水腫情況取右肺固定部分作濕重/干重比值(W/D)、肺組織冰凍切片及病理學(xué)觀察，取左肺組織分裝凍存于負(fù)80℃冰箱備用，作肺組織炎癥因子含量TNF-α、IL-1β及免疫熒光檢測(cè)NF-κBp65核轉(zhuǎn)位比率、半定量PCR法檢測(cè)肺組織NF-κB mRNA表達(dá)水平：Real time quantitative-PCR法定量檢測(cè)肺組織Angptl2 mRNA表達(dá)水平，Western blot半定量檢測(cè)肺組

5、織Angptl2蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.大鼠呼吸頻率、皮膚粘膜、活動(dòng)行為C組及C-H組大鼠一般情況好，精神狀態(tài)可，呼吸平穩(wěn)，頻率分別為(44±12)、(42±8)次/分，無(wú)紫紺出現(xiàn)，未見(jiàn)死亡。OA組大鼠于造模后1～4h呼吸頻率顯著增加，達(dá)(98±13)次/分，全身毛發(fā)豎立，紫紺出現(xiàn)，未見(jiàn)死亡。O-H組大鼠造模后數(shù)分鐘呼吸頻率顯著增加(130±22)次/分，全身毛發(fā)豎立肺部哮鳴音顯著，口唇紫紺較OA組更為明顯，4h內(nèi)死

6、亡一只。分別測(cè)得4組大鼠血脂、體重、身長(zhǎng)，C組、OA組甘油三酯(TG)、BMI兩指標(biāo)差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，C-H、O-H組TG及BMI指數(shù)較前兩組顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)
　　2.肺組織濕/干重、肺組織形態(tài)學(xué)觀察開(kāi)胸后觀察肉眼下，C組肺組織表面光滑，淺粉紅色，無(wú)充血、水腫，C-H組可見(jiàn)肺組織較正常組肥大，表面可見(jiàn)黃色脂肪組織；OA模型組肺組織呈暗紅色，可見(jiàn)廣泛點(diǎn)狀或灶狀出血，病理可見(jiàn)肺水腫、肺出血、炎細(xì)胞浸潤(rùn)等肺

7、損傷典型改變：O-H組肺組織明顯增大成暗紅色，部分部位略成黃白色，大片灶狀區(qū)域，病理可見(jiàn)明顯水腫，大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)。參照文獻(xiàn)對(duì)4組大鼠肺損傷病理學(xué)評(píng)分結(jié)果示，C-H組、O-H組及OA組均較C組升高差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且O-H組與OA組相比差異同樣具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但從W/D數(shù)據(jù)顯示O-H與OA兩組差異并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)
　　3.各組血漿TNF-α、IL-1β含量差異肺組織勻漿上清液TNF-α、IL-1β的測(cè)

8、定可評(píng)估肺組織炎癥反應(yīng)程度。在造模后4hOA、O-H兩組TNF-αI、L-1β較對(duì)照組均明顯升高，且O-H組較OA升高更為明顯。
　　4.免疫熒光檢測(cè)NF-κB p65核轉(zhuǎn)位比率圓形綠色熒光代表NF-κBp65蛋白所在的陽(yáng)性細(xì)胞圖像，熒光標(biāo)記主要濃集胞核區(qū)。C組陽(yáng)性細(xì)胞少，OA模型組核轉(zhuǎn)位陽(yáng)性細(xì)胞增多，O-H組較OA組升高更為明顯(見(jiàn)圖2)。用ImageJ軟件測(cè)定每組圖片光密度值，O-H模型組光密度值高于OA組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

9、p<0.05)；NF-KB電泳后顯示在348bp處，O-H組NF-KB mRNA表達(dá)較OA組顯著增加(p<0.05)。
　　5.PCR半定量測(cè)定肺組織NF-κB p65 mRNA表達(dá)量PCR結(jié)果顯示，C組NF-κB p65 mRNA灰度值最低，OA模型組NF-κBp65 mRNA灰度值增加，兩組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)；O-H組較C-H組灰度值明顯增加，差異同樣具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05))；同時(shí)O-H較OA組升高

10、更為明顯(p<0.05)。
　　6.BMI指數(shù)分別與肺組織W/D、病理評(píng)分、血漿炎癥因子INF-α、IL-1β相關(guān)性分析BMI指數(shù)與上述指標(biāo)均成正相關(guān)，與病理評(píng)分及IL-1β相關(guān)性最高，與W/D相關(guān)性不明顯。未造模組：BMI與W/D：0.62、病理評(píng)分：0.78、TNF-α：0.83、IL-1β：0.84；造模組：BMI與W/D：0.29、病理評(píng)分：0.85、TNF-α：0.65、IL-1β：0.79。
　　7.Real t

11、ime quantitative-PCR法定量檢測(cè)肺組織Angptl2 mRNA表達(dá)水平，Western blot法半定量檢測(cè)肺組織Angptl2 mRNA表達(dá)水平Angptl2在肺組織中呈陽(yáng)性表達(dá)，油酸造模后，OH組與CO組呈明顯升高狀態(tài)，差異具有統(tǒng)一學(xué)意義。
　　8.免疫組化分析免疫組化結(jié)果顯示：該蛋白主要集中在肺泡壁外側(cè)或內(nèi)側(cè)，相同BMI水平，肺損傷組的Angptl2表達(dá)量增加，不同BMI水平，Angptl2在高BMI組即肺

12、損傷程度嚴(yán)重組表達(dá)量增加；將OA組與O-H組相對(duì)比發(fā)現(xiàn)，在Angptl2的表達(dá)量越多的部位，肺泡壁塌陷程度越重、水腫液滲出越多，該蛋白在肺損傷程度重的組別表達(dá)更為廣泛、表達(dá)量更高，這一結(jié)果與RT-PCR、Western Blot結(jié)果相一致。
　　結(jié)論：
　　1)BMI的升高可導(dǎo)致肺損傷模型病理學(xué)評(píng)分、大鼠外周血炎癥因子TNF-α、IL-1β水平、肺組織中NF-κBp65 m RNA水平升高；
　　2)BMI指數(shù)與肺損傷