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文檔簡介
1、背景:
自首例激素誘發(fā)股骨頭壞死(osteonecrosis of the femoral head,ONFH)被Pietrogrand報(bào)道以來,世界各地陸續(xù)出現(xiàn)類似病例的報(bào)道。隨著許多內(nèi)科疾病中激素治療發(fā)揮著不可替代的作用,包括其用藥本身的長期性,近年來激素性O(shè)NFH的發(fā)病率逐步增高,且其發(fā)病過程進(jìn)展迅速,短時(shí)間內(nèi)出現(xiàn)關(guān)節(jié)破壞、功能喪失,嚴(yán)重影響患者的日?;顒?dòng)和生活自理,給生理和心理上帶來了嚴(yán)重的災(zāi)難,也成為醫(yī)學(xué)界面臨的
2、大難題。具體的發(fā)病機(jī)制尚不清楚,目前普遍被學(xué)者們接受的觀點(diǎn)是脂肪代謝紊亂、骨內(nèi)壓升高、骨質(zhì)疏松和激素的毒性作用等,但還都不能全面的闡述其發(fā)病的病理機(jī)制。人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(hBMSCS)具有多向分化的潛能,是激素性O(shè)NFH發(fā)病機(jī)制的基礎(chǔ)。隨著國外學(xué)者發(fā)現(xiàn)在激素性O(shè)NFH的骨組織中存在大量凋亡細(xì)胞,提出骨細(xì)胞凋亡可能是導(dǎo)致激素性O(shè)NFH的原因;一些學(xué)者通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn),研究了bcl-2和caspase-3的表達(dá)情況,進(jìn)一步證實(shí)了激素可導(dǎo)致成骨
3、細(xì)胞和骨細(xì)胞凋亡,參與了激素性O(shè)NFH的發(fā)病機(jī)制。同時(shí),有研究表明骨組織中存在大量的肽能神經(jīng),在骨代謝及修復(fù)功能上發(fā)揮著重要的作用。迄今為止,激素對(duì)hBMSCS中凋亡相關(guān)基因及神經(jīng)肽受體基因表達(dá)的影響,國內(nèi)外文獻(xiàn)中尚無報(bào)道。
目的:
通過體外細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn),觀察在激素誘導(dǎo)下,人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(hBMSCs)內(nèi)b淋巴細(xì)胞瘤-2(bel-2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、降鈣素基因相關(guān)肽受體(
4、CGRPR)、P物質(zhì)受體(SPR)以及過氧化物酶體增殖子活化受體γ(PPARγ)、成骨轉(zhuǎn)錄因子Runx2等基因表達(dá)的變化,進(jìn)一步探討激素性O(shè)NFH的發(fā)病機(jī)制。
方法:
密度梯度離心和貼壁培養(yǎng)獲得hBMSCs,倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),流式細(xì)胞儀鑒定后,將傳代培養(yǎng)的第3代細(xì)胞隨機(jī)分為兩組,實(shí)驗(yàn)組加入濃度為107mmol/L的地塞米松,對(duì)照組正常培養(yǎng)。于誘導(dǎo)后的第7d,實(shí)時(shí)定量-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-qPCR)分別
5、測定bcl-2 mRNA、caspase-3 mRNA、CGRPR mRNA、SPR mRNA、Runx2 mRNA以及PPARγ mRNA的表達(dá)。
結(jié)果:
分離培養(yǎng)的hBMSCs呈均勻一致的長梭形,排列成旋渦狀或放射狀。實(shí)驗(yàn)組caspase-3 mRNA、PPARγ mRNA較對(duì)照組明顯升高,2-△△Ct分別為5.99±2.00、6.93±0.70;而bcl-2 mRNA、CGRPR mRNA、SPR mR
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