Let-7microRNA在小鼠胎肺發(fā)育時(shí)期的表達(dá)檢測(cè)及其腺病毒載體質(zhì)粒的構(gòu)建.pdf

1、微RNA(microRNA,miRNA)是一類在進(jìn)化上高度保守、長(zhǎng)度約20～24個(gè)核苷酸的小分子非編碼RNA,能通過(guò)與靶基因3'非翻譯區(qū)相結(jié)合,從而抑制靶基因的翻譯或降解靶基因。Let-7 microRNA是發(fā)現(xiàn)較早的一類miRNA,最早在線蟲上發(fā)現(xiàn)let-7能調(diào)控細(xì)胞分裂的時(shí)序。此后大量證據(jù)表明,let-7參與動(dòng)物多個(gè)器官發(fā)育的調(diào)控過(guò)程,并與人類疾病發(fā)生密切相關(guān)。本研究利用real-time PCR技術(shù)檢測(cè)了let-7家族8個(gè)成員在小

2、鼠胚胎肺發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)趨勢(shì),發(fā)現(xiàn)從小鼠假腺肺的前中期到囊狀肺的前期,let-7家族8個(gè)成員均有表達(dá),且表達(dá)量均持續(xù)升高,到囊狀肺的中后期,其中l(wèi)et-7a、let-7d、let-7e、let-7f、let-7i五個(gè)家族成員表達(dá)量略有下降,let-7b、let-7c表達(dá)量沒(méi)有明顯變化、而let-7g表達(dá)量則有所升高。接著,本實(shí)驗(yàn)選取8個(gè)家族成員中表達(dá)豐度最高的let-7a和let-7d,利用原位雜交技術(shù)分析它們?cè)谛∈笈咛シ伟l(fā)育過(guò)程中的表

3、達(dá)模式,結(jié)果表明:let-7a和let-7d在小鼠胚胎肺的上皮和間充質(zhì)中均有明顯表達(dá),且在肺芽遠(yuǎn)端上皮末梢中的表達(dá)較為強(qiáng)烈,到出生后三天(P3),其在胚胎肺上皮和間充質(zhì)中的表達(dá)減弱,這種表達(dá)趨勢(shì)的變化與real-time PCR的結(jié)果相近。在此基礎(chǔ)上,本實(shí)驗(yàn)通過(guò)構(gòu)建pDC316-CMV-control、pDC316-CMV-let-7a以及pDC316-mCMV-mK-ras三個(gè)腺病毒表達(dá)載體,并將其分別轉(zhuǎn)染細(xì)胞,利用RT-PCR以及w