豬場土壤中豬細小病毒和鏈球菌的檢測與消毒劑的篩選.pdf

1、隨著我國畜牧養(yǎng)殖業(yè)尤其是集約化養(yǎng)殖的發(fā)展,養(yǎng)殖場周圍的土壤環(huán)境污染問題越來越受到大家的關注。為此本研究選取豬細小病毒和豬鏈球菌病原菌為代表,首先建立了檢測土壤中兩種病原菌的方法并利用建立的檢測方法對豬場土壤中的污染情況進行了調查,然后對相關的消毒劑進行了篩選,以有效控制豬場土壤環(huán)境中病原菌的污染。
　　 (1)豬場土壤中豬細小病毒檢測方法的建立及應用
　　 選擇豬細小病毒VP2基因為靶目標,用環(huán)介導恒溫擴增(LAMP)引

2、物設計專用軟件,設計4條識別目的片段6個特異性位點的引物。對土壤中常見的病原菌進行LAMP擴增反應,未發(fā)現(xiàn)非特異性擴增反應,說明其具有較好的特異性。敏感性試驗結果表明其檢測靈敏度為0.002個TCID50,比PCR高10倍。用該方法對采自湖北18個豬場的92份樣品進行了檢測,LAMP和PCR分別檢出14份和10份陽性,檢測結果表明所建立的LAMP是一種特異性高、敏感性強而又快速簡便的檢測方法。
　　 (2)豬場土壤中豬鏈球菌的檢

3、測方法的建立及應用
　　 選擇豬鏈球菌GDH基因為靶目標,建立了土壤中豬鏈球菌的PCR檢測方法。利用該方法對豬場土壤中豬鏈球菌的感染情況進行了檢測,結果在采自18個豬場的92份樣品中檢出陽性21份,陽性率為22.83％。
　　 同時對土壤中豬鏈球菌的培養(yǎng)基進行了篩選。以各抗菌藥物對豬鏈球菌的MIC90和抗菌譜差異,最終選定多粘菌素B、四環(huán)素、磺胺間甲氧嘧啶作為豬鏈球菌的抗菌添加劑,其濃度分別為30μg/mL、15μg/m

4、L、15μg/mL,生長率為94.1％,可以用于土壤中豬鏈球菌的分離和檢測。
　　 (3)消毒劑對豬場土壤中豬鏈球菌的殺滅作用
　　 本研究選取依綠笑、戊二醛、安必殺、天然凈四種消毒劑對土壤中豬鏈球菌進行消毒評價。稀釋液試驗結果表明:0.1％Tween80/PBS分散性最好。中和劑試驗結果表明:安比殺選用0.5％Na2S2O3+1％卵磷脂+1％ Tween80/PBS；依綠笑選用0.5％Na2S2O3+1％Tween80

5、/PBS；戊二醛選用1％甘氨酸+1％卵磷脂+1％Tween80/PBS。土壤載體試驗結果表明:100mg/L二氧化氯的依綠笑溶液作用1h或0.1％戊二醛溶液作用10min對豬鏈球菌的殺滅率達100.0％,安必殺只能在2000mg/L高濃度作用30min下才能殺滅豬鏈球菌,天然凈對豬鏈球菌基本上沒有殺滅作用。
　　 田間試驗結果表明:選用600mg/L二氧化氯的依綠笑溶液和0.1％戊二醛溶液分別在24h和48h對土壤中的豬鏈球菌的