變形鏈球菌LuxS基因缺陷株的構(gòu)建及密度感應(yīng)分子AI-2活性的檢測(cè).pdf

1、天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文變形鏈球菌LuxS基因缺陷株的構(gòu)建及密度感應(yīng)分子AI2活性的檢測(cè)姓名：韓福勝申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：口腔臨床醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：于丹妮20070501天律醫(yī)科土學(xué)碩士學(xué)位論文及拖尾現(xiàn)象，分子量大小與預(yù)計(jì)大小相同。2經(jīng)酶切鑒定目的質(zhì)粒各片段插入無誤，插入片段測(cè)序顯示堿基無錯(cuò)配，含目的質(zhì)粒的大腸桿菌株可在紅霉素抗性的LB培養(yǎng)基內(nèi)生長(zhǎng)良好，紅霉素抗性基因可正常表達(dá)。3PCR方法擴(kuò)增突變株LuxS、Eymr基因顯示，LuxS基

2、因已被完整敲除掉，證實(shí)篩選得到了LuxS基因缺失變鏈菌突變株。突變株不能誘導(dǎo)哈氏弧菌BBl70的生物發(fā)光，說明突變株不能再產(chǎn)生AI2類信號(hào)分子。經(jīng)連續(xù)培養(yǎng)20代后證實(shí)，變鏈菌突變株具有良好的穩(wěn)定性。4變鏈菌UAl59的培養(yǎng)液過濾上清能夠誘導(dǎo)AI2報(bào)告菌株哈氏弧菌BBl70發(fā)光，表明變鏈菌株中含有m2分子合成基因，從而提示變鏈菌中存在Al2數(shù)量感應(yīng)通路。而突變株不能誘導(dǎo)生物發(fā)光，說明LuxS基因成功敲除。結(jié)論：本研究利用AI2誘導(dǎo)發(fā)光檢測(cè)

3、法對(duì)變鏈菌培養(yǎng)上清液檢測(cè)，表明變鏈菌中含有群體感應(yīng)信號(hào)分子AJ2的合成基因LuxS。采用嵌套式PCR擴(kuò)增所需基因片段較傳統(tǒng)的PCR準(zhǔn)確性更高，避免對(duì)帶有酶切位點(diǎn)的引物空間結(jié)構(gòu)干擾而致的非特異擴(kuò)增，提高了擴(kuò)增的效率和準(zhǔn)確性。本研究所構(gòu)建的變鏈菌LuxS基因同源重組克隆載體正確，紅霉素抗性片段表達(dá)良好。通過電擊轉(zhuǎn)化法成功構(gòu)建出變鏈菌LuxS基因缺失突變株，為下一步研究LuxS基因?qū)ψ冩溇慢x性的影響奠定基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：變形鏈球菌；密度感應(yīng)；L