2型豬鏈球菌強(qiáng)素株05ZYH33表面蛋白Sao的生物學(xué)功能研究.pdf

1、豬鏈球菌(Streptococcus suis,簡稱S.suis)是一種重要的人獸共患病病原菌,可引起豬患腦膜炎、肺炎、關(guān)節(jié)炎、敗血癥甚至急性死亡,還可以感染人并導(dǎo)致腦膜炎、敗血癥、心內(nèi)膜炎以及罕見的鏈球菌中毒性休克綜合征(Streptococcaltoxic shock syndrome,STSS)等,不僅給全世界的養(yǎng)豬業(yè)造成巨大損失,而且也造成了嚴(yán)重的公共衛(wèi)生事件。因此S.suis感染的預(yù)防控制及致病機(jī)制的研究成為亟待解決的問題。<

2、br>　　 通常表面抗原比較保守,廣泛分布于不同的分離株中,而且容易接觸機(jī)體免疫系統(tǒng)引起免疫應(yīng)答,有很強(qiáng)的免疫保護(hù)作用。研究者開始從S.suis菌體表面抗原著手,篩選有效的保護(hù)性抗原。所以本試驗(yàn)第一部分中對細(xì)菌表面新近發(fā)現(xiàn)蛋白Sao進(jìn)行了表達(dá)純化等工作。此外,許多研究表明細(xì)胞壁或提純后的細(xì)胞壁成分能夠加重被感染宿主的炎癥反應(yīng)等,與S.suis的致病性相關(guān)。因此本試驗(yàn)第二部分利用同源重組原理構(gòu)建了sao基因敲除突變株,并對其進(jìn)行了初步研

3、究。
　　 1.Sao蛋白的原核表達(dá)及特性研究本研究從S.suis2中國強(qiáng)毒株05ZYH33中克隆表達(dá)出重組蛋白rSao,利用純化后的rSao制備了該蛋白的兔多抗血清。利用全菌豬抗血清對重組蛋白進(jìn)行western blot分析,結(jié)果有明顯的條帶出現(xiàn),表明該蛋白在S.suis2感染過程中表達(dá)并能激發(fā)宿主的體液免疫應(yīng)答。重組Sao蛋白的高效價(jià)兔多抗血清能夠促進(jìn)人全血對細(xì)菌的殺傷作用。Sao蛋白能競爭抑制S.suis對Hep-2細(xì)胞的

4、黏附,提示Sao蛋白可能參與細(xì)菌黏附過程。
　　 2.SaD基因敲除突變株的構(gòu)建及特性研究為了進(jìn)一步研究Sao在S.suis2致病性過程中的作用,通過同源重組原理構(gòu)建了sao基因敲除突變株,并通過PCR、RT-PCR、Western blot方法對其進(jìn)行了鑒定,證實(shí)突變株構(gòu)建成功。生物學(xué)特性分析顯示野生株與突變株在生長特性、菌落形態(tài)和溶血活性方面沒有明顯差異；動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明突變株與野生株相比對BABL/c小鼠的毒力未發(fā)生明顯改