羅非魚無乳鏈球菌的生物學(xué)特性及其滅活疫苗的研究.pdf

1、羅非魚（Tilapia）從上世紀(jì)50年代引入我國，經(jīng)過幾十年的發(fā)展，我國羅非魚養(yǎng)殖產(chǎn)量已占全球50％，加工出口量躍居世界榜首。自2008年開始我國多個(gè)羅非魚主養(yǎng)區(qū)頻發(fā)羅非魚暴發(fā)性傳染病，使當(dāng)?shù)仞B(yǎng)殖業(yè)遭受巨大的經(jīng)濟(jì)損失，成為限制羅非魚產(chǎn)業(yè)發(fā)展的一大瓶頸。而目前對(duì)該病防治方法主要采用抗生素，但是存在效果差、耐藥性、藥物殘留以及環(huán)境污染等諸多問題，進(jìn)而成為出口貿(mào)易的綠色壁壘。因而，迫切需要探索安全高效的防治措施以促進(jìn)羅非魚養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)健康

2、發(fā)展。
　　本研究前期開展了該病病原學(xué)研究，從海南省文昌市采集具有典型癥狀的羅非魚分離到1株細(xì)菌HNLFYL4，通過回感試驗(yàn)成功復(fù)制暴發(fā)性傳染病癥狀。同時(shí)，利用分子生物學(xué)等方法鑒定該菌為無乳鏈球菌(Streptococcus agalactiae)。本試驗(yàn)以HNLFYL4為典型菌株，開展羅非魚無乳鏈球菌相關(guān)生物學(xué)特性的研究，明確該菌株具β溶血，其外毒素的最佳產(chǎn)生條件為THB培養(yǎng)基上28℃靜置培養(yǎng)48h;特性研究表明該溶血素能溶解多

3、種動(dòng)物的紅細(xì)胞，在-20℃保存較穩(wěn)定，對(duì)熱非常敏感。
　　為了探明細(xì)菌及其外毒素的致病力，制備HNLFYL4全菌液、胞外產(chǎn)物(ECP)及菌體對(duì)ICR小白鼠和不同規(guī)格羅非魚開展致病性試驗(yàn)，結(jié)果表明，HNLFYL4全菌液對(duì)小鼠的致病力遠(yuǎn)遠(yuǎn)強(qiáng)于羅非魚，其LD50為1×104 CFU/ml;而不同規(guī)格的羅非魚其致病力相近，同時(shí)佐證了外毒素的致病力。
　　以HNLFYL4為疫苗菌株，建立最佳發(fā)酵參數(shù)，研制了3類滅活疫苗，分別為滅活全菌

4、疫苗(FKC)、胞外產(chǎn)物滅活疫苗(ECP)及二者的混合二聯(lián)苗(FKC+ECP)，并從免疫保護(hù)力和血清抗體效價(jià)2個(gè)方面評(píng)價(jià)了無乳鏈球菌疫苗的免疫效果，結(jié)果顯示注射組的FKC、ECP和FKC+ECP三組對(duì)同源菌株的相對(duì)免疫保護(hù)率分別為83.3％、40％和90％;浸泡組的FKC、ECP和FKC+ECP三組對(duì)同源菌株的相對(duì)免疫保護(hù)率分別為72.2％、30％和80％; FKC+ECP組顯著高于其他組。證實(shí)了FKC和FKC+ECP這2類疫苗對(duì)羅非魚