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文檔簡介
1、羅非魚(Tilapia)從上世紀(jì)50年代引入我國,經(jīng)過幾十年的發(fā)展,我國羅非魚養(yǎng)殖產(chǎn)量已占全球50%,加工出口量躍居世界榜首。自2008年開始我國多個(gè)羅非魚主養(yǎng)區(qū)頻發(fā)羅非魚暴發(fā)性傳染病,使當(dāng)?shù)仞B(yǎng)殖業(yè)遭受巨大的經(jīng)濟(jì)損失,成為限制羅非魚產(chǎn)業(yè)發(fā)展的一大瓶頸。而目前對該病防治方法主要采用抗生素,但是存在效果差、耐藥性、藥物殘留以及環(huán)境污染等諸多問題,進(jìn)而成為出口貿(mào)易的綠色壁壘。因而,迫切需要探索安全高效的防治措施以促進(jìn)羅非魚養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)健康
2、發(fā)展。
本研究前期開展了該病病原學(xué)研究,從海南省文昌市采集具有典型癥狀的羅非魚分離到1株細(xì)菌HNLFYL4,通過回感試驗(yàn)成功復(fù)制暴發(fā)性傳染病癥狀。同時(shí),利用分子生物學(xué)等方法鑒定該菌為無乳鏈球菌(Streptococcus agalactiae)。本試驗(yàn)以HNLFYL4為典型菌株,開展羅非魚無乳鏈球菌相關(guān)生物學(xué)特性的研究,明確該菌株具β溶血,其外毒素的最佳產(chǎn)生條件為THB培養(yǎng)基上28℃靜置培養(yǎng)48h;特性研究表明該溶血素能溶解多
3、種動物的紅細(xì)胞,在-20℃保存較穩(wěn)定,對熱非常敏感。
為了探明細(xì)菌及其外毒素的致病力,制備HNLFYL4全菌液、胞外產(chǎn)物(ECP)及菌體對ICR小白鼠和不同規(guī)格羅非魚開展致病性試驗(yàn),結(jié)果表明,HNLFYL4全菌液對小鼠的致病力遠(yuǎn)遠(yuǎn)強(qiáng)于羅非魚,其LD50為1×104 CFU/ml;而不同規(guī)格的羅非魚其致病力相近,同時(shí)佐證了外毒素的致病力。
以HNLFYL4為疫苗菌株,建立最佳發(fā)酵參數(shù),研制了3類滅活疫苗,分別為滅活全菌
4、疫苗(FKC)、胞外產(chǎn)物滅活疫苗(ECP)及二者的混合二聯(lián)苗(FKC+ECP),并從免疫保護(hù)力和血清抗體效價(jià)2個(gè)方面評價(jià)了無乳鏈球菌疫苗的免疫效果,結(jié)果顯示注射組的FKC、ECP和FKC+ECP三組對同源菌株的相對免疫保護(hù)率分別為83.3%、40%和90%;浸泡組的FKC、ECP和FKC+ECP三組對同源菌株的相對免疫保護(hù)率分別為72.2%、30%和80%; FKC+ECP組顯著高于其他組。證實(shí)了FKC和FKC+ECP這2類疫苗對羅非魚
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