迷走神經(jīng)與快速心房起搏犬心房肌Cx40、Cx43異質(zhì)性分布及心房纖維化相關(guān)性實驗研究.pdf

1、背景及目的：正常心臟結(jié)構(gòu)、功能的完整性保證了心肌細(xì)胞間順序電傳導(dǎo)和機械收縮，而當(dāng)心肌受到內(nèi)、外界的刺激出現(xiàn)病變損傷時，通過激活細(xì)胞間的信號傳導(dǎo)而最終導(dǎo)致心肌細(xì)胞、胞外基質(zhì)和血管的結(jié)構(gòu)、功能改變稱之為心肌重構(gòu)。心臟的縫隙連接是實現(xiàn)心肌細(xì)胞間電傳導(dǎo)的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，其數(shù)量及空間分布的變化將導(dǎo)致心肌電生理穩(wěn)定性下降，誘發(fā)心律失常。近年研究顯示心房內(nèi)徑、心房壓力、心房內(nèi)皮細(xì)胞功能缺失、心房肌細(xì)胞間縫隙連接蛋白(Connexin，Cx)脫磷酸化等在心房

2、顫動(簡稱房顫)發(fā)生和維持中起重要作用。而在迷走神經(jīng)介導(dǎo)的房顫(簡稱迷走性房顫)中，迷走神經(jīng)纖維如何調(diào)節(jié)心房基質(zhì)的代謝及功能，其與房顫發(fā)生的關(guān)系如何，作用機制也未明了。心房膠原容積分?jǐn)?shù)代表心房肌細(xì)胞間質(zhì)膠原蛋白沉積的多少，其變化在一定程度上反應(yīng)心房纖維化程度。本研究基于去除或保留心臟迷走神經(jīng)并持續(xù)快速心房起搏的動物模型，分析心房Cx40、Cx43mRNA表達(dá)量及其不均一的空間分布及心房膠原容積分?jǐn)?shù)的變化，從Cx基因水平及心房間質(zhì)纖維化等

3、方面探討上腔靜脈、主動脈根部脂肪墊(SVC-Ao脂肪墊)發(fā)出的迷走神經(jīng)對房顫所致的心房電重構(gòu)及結(jié)構(gòu)重構(gòu)的可能作用機制。
　　 方法：成年健康雜種犬24只，雌性各半，分為假手術(shù)組(n=8)，切除SVC-Ao脂肪墊組(n=8)，保留SVC-Ao脂肪墊組(n=8)。實驗犬經(jīng)開胸制作心包吊籃并暴露SVC-Ao脂肪墊，切除組切除SVC-Ao脂肪墊而保留組不切除，兩組實驗犬均縫植單極電極于高位右心房，并在右側(cè)腋窩皮下囊袋中埋植起搏器(起搏模

4、式為AOO，脈沖頻率為500～650次/分)，持續(xù)起搏6周。起搏結(jié)束后，觀察各組實驗犬有無自發(fā)性房顫事件，并通過程控刺激誘發(fā)并記錄房顫事件及持續(xù)時間。然后處死動物，依照左心房(LA)、右心房(RA)、左心耳(LAA)、右心耳(RAA)、房間隔(AS)五部位順序剪取心房肌組織，采用熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)郊夹g(shù)檢測Cx40、Cx43mRNA表達(dá)量；應(yīng)用Masson染色技術(shù)分析心肌間質(zhì)膠原纖維的空間表達(dá)量。研究迷走神經(jīng)在持續(xù)性快速心房起搏犬中

5、對心房各部位Cx40、Cx43表達(dá)的影響及間質(zhì)膠原表達(dá)是否存在空間分布的不均一性，進(jìn)一步探討迷走神經(jīng)在心房顫動發(fā)生及維持中的機制。
　　 結(jié)果：(1)心房顫動誘發(fā)率及持續(xù)時間，保留SVC-Ao脂肪墊組持續(xù)性房顫的誘發(fā)率為5/7，持續(xù)時間為52.0±6.2min，切除SVC-Ao脂肪墊組和假手術(shù)組均未能誘發(fā)出持續(xù)性房顫。(2)Cx40mRNA表達(dá)量切除組(3.89±0.73)、保留組(4.15±0.77)均較假手術(shù)組(3.36±0

6、.76)增多(P＜0.05)，但切除和保留組組間無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。同時，假手術(shù)組內(nèi)，LA、RA、RAA、AS間Cx40mRNA表達(dá)無差異，且均較LAA處Cx40mRNA多(P＜0.01)；切除SVC-Ao脂肪墊起搏后，LA、RA、LAA處Cx40mRNA表達(dá)增多(組內(nèi)比較，P＜0.01)，保留SVC-Ao脂肪墊組起搏后，LAA、RAACx40mRNA表達(dá)最多，去除SVC-Ao脂肪墊后其表達(dá)明顯減少。(3)Cx43mRNA表達(dá)

7、量切除組(5.62±2.45)、保留組(2.59±1.15)及假手術(shù)組(4.32±1.87)，三組間均有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.01)。且假手術(shù)組內(nèi)各部位表達(dá)亦有不同，RA、RAA最多，LA、LAA次之，AS最少。保留SVC-Ao脂肪墊起搏后，LA、RA、RAA表達(dá)減少，切除組起搏后，LA、RA、RAA、AS表達(dá)增多?？焖傩姆科鸩鸶鞑课籆x43mRNA表達(dá)量變化，其中SVC-Ao脂肪墊的去除與否對其表達(dá)有重要影響，LA、RA的Cx43m

8、RNA表達(dá)量在切除組最多、而在保留組表達(dá)量最少。(4)心房膠原容積分?jǐn)?shù)，假手術(shù)組(5.54±2.60)％、保留脂肪墊組(7.62±3.25)％、切除脂肪墊組(4.36±2.64)％三組問心房膠原纖維表達(dá)均有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.01)，且LAA(6.98±3.39)％、RAA(6.30±2.25)％及AS(7.22±4.30)％的表達(dá)量較LA(4.55±2.03)％、RA(4.36±1.95)％增高(P＜0.01)，但假手術(shù)組與切除脂肪墊

9、組內(nèi)5個部位的膠原容積分?jǐn)?shù)間無顯著差異，切除脂肪墊組膠原纖維表達(dá)除RAA、AS兩部位較假手術(shù)組同部位表達(dá)減少外，余無變化。保留脂肪墊組膠原纖維在LAA、AS顯著增多。
　　 結(jié)論：(1)SVC-Ao脂肪墊發(fā)出的迷走神經(jīng)介導(dǎo)心房電重構(gòu)，重構(gòu)易化房顫事件的誘發(fā)與維持，而去除迷走神經(jīng)可以削弱該效應(yīng)。(2)持續(xù)性快速心房起搏致心房Cx40、Cx43mRNA含量改變，尤其是其在心房空間分布的不均一性，從而致使心肌電傳導(dǎo)不均一性增加，成為發(fā)