gp350基因與gp350-C3d3融合基因真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建表達(dá)及其功能的初步研究.pdf

1、EB 病毒是全世界流行的γ型人類皰疹病毒，具有嗜B 淋巴細(xì)胞性，病因?qū)W上與中國南方地區(qū)及東南亞的未分化型鼻咽癌(uNPC)、非洲赤道地區(qū)的BurkitT淋巴瘤關(guān)系密切，這兩種疾病在其他地區(qū)卻比較少見。
　　 目前EB 病毒及其相關(guān)腫瘤的治療方法依然有限，鑒于病毒在這些疾病的發(fā)病機(jī)制中所扮演的重要角色，采用EB 病毒蛋白抗原的分子干預(yù)措施可能是預(yù)防治療EB病毒相關(guān)疾病的有效措施。在這些方案中，疫苗接種免疫應(yīng)該是研究中的首要選擇，在

2、本課題中，我們通過基因工程技術(shù)構(gòu)建了gp350和C3d3的融合質(zhì)粒，希望表達(dá)的融合蛋白在進(jìn)一步研究中具有特異的免疫原性。
　　 目的:構(gòu)建EB 病毒包膜糖蛋白gp350全長序列及其與三個(gè)補(bǔ)體片段C3d 串聯(lián)基因在人體真核細(xì)胞中表達(dá)的載體，并進(jìn)行其免疫功能的初步研究。
　　 方法:以pcDNA3.1+gp350為模板PCR 擴(kuò)增出gp350cDNA 全長片段，將PCR 產(chǎn)物經(jīng)BglⅡ和BamHⅠ酶切消化后與經(jīng)同樣兩個(gè)限制性

3、內(nèi)切酶消化的真核表達(dá)載體pSG.SS.YL和pSG.SS.C3d3.YL 連接，轉(zhuǎn)化后挑取陽性克隆進(jìn)行PCR、酶切鑒定并測序；然后將純化的重組載體用脂質(zhì)體法分別轉(zhuǎn)染人類Hela細(xì)胞培養(yǎng)24h，分別用Western blot及細(xì)胞免疫化學(xué)染色檢測gp350蛋白和gp350-C3d3 融合蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果:成功構(gòu)建含gp350全長基因序列的載體pSG.SS.gp350.YL和pSG.SS.
　　 Gp350.C3d3