皮蠅素基因真核表達質粒的構建及其免疫特性的研究.pdf

1、牛皮蠅蛆病主要是牛皮蠅和紋皮蠅的幼蟲寄生在牛體內引起的一種寄生蟲病。該病危害很嚴重，對養(yǎng)牛業(yè)和皮革加工業(yè)有著非常大的影響，而且妨礙公共衛(wèi)生引發(fā)人畜共患病，現(xiàn)行的藥物防治方法存在副作用，畜產品藥物殘留等缺點。因此人們越來越重視該病的免疫防治研究。
　　本研究以重組克隆載體pTHA和pTHC為模板，利用PCR技術和重疊延伸剪接技術，擴增HA-HC融合基因，連接到克隆載體pMD19-T simple vector中，構建重組克隆質粒pM

2、D19-T-HAC（簡稱pTHAC）。將HA、HC、HA-HC基因亞克隆到真核表達載體pVAX1中，構建重組真核表達質粒pVAX1-HA(簡稱pVHA)、pVAX1-HC（簡稱pVHC）和pVAX1-HAC(簡稱pVHAC)。將各重組質粒體外轉染小鼠胎兒成纖維細胞和牛胎兒成纖維細胞，檢測目的基因的瞬時表達情況。在體內將各重組表達質粒和空載體pVAX1及PBS免疫昆明小鼠，共免疫3次，每次間隔2周，采8次血清，應用間接ELISA方法檢測血

3、清抗體效價。第3次免疫2周后，以紋皮蠅重組蛋白為刺激原，MTT法檢測小鼠脾臟淋巴細胞增殖情況；再以γ干擾素酶聯(lián)免疫分析試劑盒檢測小鼠脾臟淋巴細胞分泌的IFN-γ含量。結果表明：與空載體pVAX1和PBS對照組相比，各重組表達質粒免疫組小鼠的抗體水平逐漸上升，差異極顯著（P﹤0.01）。第3次免疫2周后，DNA疫苗免疫組的淋巴細胞增殖試驗刺激值（SI）高于對照組，差異極顯著（P﹤0.01）；雙價 DNA疫苗組的刺激值高于單價 DNA疫苗