HCGP-39基因真核表達(dá)系統(tǒng)的構(gòu)建和初步的功能研究.pdf

1、HCGP-39屬于哺乳動(dòng)物幾丁質(zhì)酶家族，但不具有幾丁質(zhì)酶活性。近年來(lái)的臨床研究發(fā)現(xiàn)，HCGP-39基因表達(dá)的上調(diào)與多種腫瘤的轉(zhuǎn)移與預(yù)后相關(guān)，提示其可能參與腫瘤細(xì)胞與周?chē)|(zhì)之間的相互作用。而在其他一些研究工作中，有報(bào)道該蛋白所屬幾丁質(zhì)酶家族的某些成員具有生長(zhǎng)因子樣作用。迄今為止，HCGP-39基因的具體生理功能仍不清楚。為此，我們構(gòu)建了含HCGP-39基因全長(zhǎng)cDNA編碼序列的真核表達(dá)載體，采用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染正常人肝細(xì)胞株L02和肝癌細(xì)胞

2、株SMMC-7721，并對(duì)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞周期變化進(jìn)行觀察，以期了解該基因在細(xì)胞周期調(diào)控過(guò)程中可能起到的作用。 目的：構(gòu)建含HCGP-39基因全長(zhǎng)cDNA編碼序列的真核表達(dá)載體并對(duì)其功能進(jìn)行研究； 方法：從新鮮人乳腺癌組織樣品中提取總RNA，反轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一鏈，用特異引物擴(kuò)增獲得目的DNA片段，連接載體后測(cè)序。測(cè)序正確后，構(gòu)建含目的片段的真核表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染肝細(xì)胞L02和肝癌細(xì)胞SMMC-7721，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)