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文檔簡介
1、目的:構建BC022687(N端)的原核表達載體,誘導該質粒在大腸桿菌中表達并純化表達融合蛋白;構建BC022687(全長)基因真核表達載體,探討融合蛋白在細胞內表達及定位。
方法:1.以健康成年雄性小鼠的睪丸組織為來源,進行RT-PCR,建立小鼠睪丸cDNA文庫;2.以小鼠睪丸cDNA文庫為模板,PCR擴增BC022687(N端)編碼序列及全長編碼序列;3.TA克隆后測序;4.構建BC022687(N)端原核質粒,以pET-
2、28a(+)原核質粒為載體,并轉化大腸桿菌BL-21細胞,誘導蛋白表達,用Western Blot鑒定融合蛋白,Ni-NTA親和層析法純化融合蛋白;5.構建BC022687(全長)真核質粒,以pEGFP-C1真核質粒為載體,并轉染CHO細胞,誘導蛋白表達,Western blot及激光共聚焦驗證細胞內BC022687(全長)融合蛋白的表達與定位。
結果:1.BC022687(N端)/pET-28a(+)原核質粒構建成功,獲得純
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