BC022687基因原核及真核重組質(zhì)粒的構(gòu)建及表達(dá).pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:構(gòu)建BC022687(N端)的原核表達(dá)載體，誘導(dǎo)該質(zhì)粒在大腸桿菌中表達(dá)并純化表達(dá)融合蛋白;構(gòu)建BC022687（全長）基因真核表達(dá)載體，探討融合蛋白在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)及定位。
　　方法:1.以健康成年雄性小鼠的睪丸組織為來源，進(jìn)行RT-PCR，建立小鼠睪丸cDNA文庫;2.以小鼠睪丸cDNA文庫為模板，PCR擴(kuò)增BC022687(N端)編碼序列及全長編碼序列;3.TA克隆后測序;4.構(gòu)建BC022687(N)端原核質(zhì)粒，以pET-

2、28a(+)原核質(zhì)粒為載體，并轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL-21細(xì)胞，誘導(dǎo)蛋白表達(dá)，用Western Blot鑒定融合蛋白，Ni-NTA親和層析法純化融合蛋白;5.構(gòu)建BC022687（全長）真核質(zhì)粒，以pEGFP-C1真核質(zhì)粒為載體，并轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞，誘導(dǎo)蛋白表達(dá)，Western blot及激光共聚焦驗證細(xì)胞內(nèi)BC022687（全長）融合蛋白的表達(dá)與定位。
　　結(jié)果:1.BC022687(N端)/pET-28a(+)原核質(zhì)粒構(gòu)建成功，獲得純

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