CD80-IgG融合基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其體外功能性表達(dá)的研究.pdf

1、T細(xì)胞的活化、增殖,免疫反應(yīng)的啟動(dòng)需要雙信號(hào),即:T細(xì)胞膜表面的抗原受體(TCR)與MHC抗原肽復(fù)合物結(jié)合所傳遞的抗原特異性信號(hào)(第一信號(hào))和抗原提呈細(xì)胞(APC)表面表達(dá)的共刺激分子與淋巴細(xì)胞表面表達(dá)的相應(yīng)配體結(jié)合所提供的共刺激信號(hào)(第二信號(hào)),后者是抗原非特異性的."雙信號(hào)"模式是T細(xì)胞活化,啟動(dòng)免疫反應(yīng)的必要條件,二者缺一不可.在缺乏共刺激信號(hào)的條件下將腫瘤抗原提呈給T細(xì)胞會(huì)導(dǎo)致T細(xì)胞無(wú)反應(yīng)或無(wú)能(Anergy)以及凋亡.腫瘤患者

2、體內(nèi)不缺乏功能性T細(xì)胞,許多現(xiàn)象也表明通過(guò)一定的方法可以誘導(dǎo)抗腫瘤免疫反應(yīng),但腫瘤細(xì)胞卻能在宿主體內(nèi)生存和發(fā)展.現(xiàn)在已經(jīng)確認(rèn)腫瘤細(xì)胞是通過(guò)一些機(jī)制逃逸了宿主免疫系統(tǒng)的監(jiān)視,從而在體內(nèi)建立起生存優(yōu)勢(shì).B7家族的分子是參與免疫反應(yīng)最主要的共刺激分子,它主要包括兩個(gè)成員:B7.1(CD80)和B7.2(CD86).其中CD80分子是免疫反應(yīng)的正性調(diào)節(jié)因子,與淋巴細(xì)胞的活化、增殖以及免疫反應(yīng)的啟動(dòng)關(guān)系最為密切.就急性髓性白血病而言,缺失或者低表

3、達(dá)CD80分子是AML細(xì)胞免疫逃逸的主要方式之一.有鑒于此,我們?cè)噲D構(gòu)建CD80-IgG融合蛋白,期望能通過(guò)融合蛋白分子中IgG的Fc段與白血病細(xì)胞表面高表達(dá)的高親和力Fc受體(FcR)結(jié)合,從而將CD80分子錨著在白血病細(xì)胞表面,以提高其表面CD80分子的密度.正常細(xì)胞不表達(dá)Fc受體或者表達(dá)有限,因此具有特異性.通過(guò)切斷AML細(xì)胞一條主要的免疫逃逸途徑,探索根治白血病的新方法.該試驗(yàn)主要分為三個(gè)部分:第一部分融合基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建

4、;目的:分別擴(kuò)增出小鼠CD80分子胞外段(包括信號(hào)肽)和IgGFc段(包括鉸鏈區(qū),CH2,CH3功能域)的cDNA,然后將兩段目的基因分別克隆入pcDNA3.0質(zhì)粒中,構(gòu)建融合基因表達(dá)載體.第二部分融合基因表達(dá)載體的轉(zhuǎn)染及穩(wěn)定表達(dá)株的篩選;目的:將融合基因表達(dá)載體轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞,以獲得CD80-IgG融合蛋白的體外表達(dá).第三部分CD80-IgG融合蛋白的體外功能檢測(cè);目的:體外鑒定表達(dá)產(chǎn)物是否能提高AML細(xì)胞表面CD80分子的表達(dá),促