Mico PET-CT受體顯像在中藥姜黃素治療帕金森病模型鼠中的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：本研究擬采用多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白顯像劑(11C-CFT)和D2受體(11C-RAC)顯像劑觀察中藥姜黃素對(duì)帕金森(PD)大鼠的治療效果，以探討姜黃素對(duì)PD大鼠的保護(hù)作用及機(jī)制，為其臨床應(yīng)用提供依據(jù)。
　　方法：
　　1偏側(cè)PD模型制備：選用健康雄性SD大鼠80只，采用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)用腦立體定位儀，用兩點(diǎn)單側(cè)注射法將6-羥基多巴胺(6-OHDA)注射至大鼠黑質(zhì)致密部(SNc)，其中20只大鼠注射生理鹽水做為空白對(duì)照組。
　　2

2、行為學(xué)測(cè)試：術(shù)后兩周，在安靜環(huán)境下，將實(shí)驗(yàn)大鼠放在平底鍋內(nèi)，腹腔注射阿樸嗎啡(APO)(0.5mg/kg)誘發(fā)大鼠的旋轉(zhuǎn)行為，注藥后約5min，大鼠多以左側(cè)后肢為支撐點(diǎn)，原地轉(zhuǎn)動(dòng)，首尾相接。待大鼠旋轉(zhuǎn)平穩(wěn)，開(kāi)始觀察并記錄大鼠旋轉(zhuǎn)次數(shù)，計(jì)數(shù)30min內(nèi)旋轉(zhuǎn)圈數(shù)(總轉(zhuǎn)數(shù)≥210r/30min)，平均旋轉(zhuǎn)圈數(shù)≥7r/min者視為完全成功模型。生理對(duì)照組大鼠無(wú)任何旋轉(zhuǎn)行為。
　　3實(shí)驗(yàn)分組：將生理鹽水對(duì)照組大鼠和經(jīng)APO誘導(dǎo)篩選成功的大鼠

3、隨機(jī)分為三組，即生理鹽水對(duì)照組、模型組、姜黃素組，每組各18只。姜黃素組大鼠每天在同一時(shí)間點(diǎn)用姜黃素(劑量100mg/kg)灌胃1次/d，連續(xù)8周，另兩組大鼠每天在同一時(shí)間點(diǎn)用相同劑量的生理鹽水灌胃。
　　4實(shí)驗(yàn)研究
　　(1)Micro PET/CT顯像：將APO誘導(dǎo)篩選成功的大鼠，通過(guò)尾靜脈注射3-4 mCi的11C-CFT，30min后，按5ml/kg體重腹腔注射質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的水合氯醛進(jìn)行麻醉，然后按大鼠注射的先后

4、順序分別行Micro PET/CT顯像，掃描黑質(zhì)位置20分鐘。以同樣的方法行11C-RAC顯像，觀察大鼠攝取顯像劑的情況，分別勾畫(huà)雙側(cè)紋狀體、小腦部位的感興趣區(qū)，并測(cè)量其放射性計(jì)數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　(2)氧化應(yīng)激實(shí)驗(yàn)室檢查：取各組大鼠各6只，麻醉后將大鼠斷頭處死，輕輕剝離出毀損側(cè)腦組織，用精密電子天平稱重，用冰冷的勻漿液制成10%的勻漿，-80℃冰箱保存。待測(cè)腦組織勻漿中超氧化物歧化酶活性(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活性(G

5、SH-PX)及丙二醛(MDA)含量多少，將所得的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　(3)病理學(xué)檢查：取各組大鼠各6只，完整的剝離出大鼠的中腦組織(含黑質(zhì)、紋狀體)，用4%多聚甲醛固定，24小時(shí)后，石蠟包埋，行常規(guī)HE染色及免疫組化染色測(cè)定各組黑質(zhì)區(qū)的酪氨酸羥化酶(TH)陽(yáng)性神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)量，將所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　(4)高效液相色譜檢查：取各組大鼠各6只，在冰盤(pán)上分離出雙側(cè)黑質(zhì)和紋狀體，將組織樣品進(jìn)行預(yù)處理，放在-80℃冰箱保

6、存。根據(jù)峰值面積計(jì)算其測(cè)定值，將所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：
　　1 Micro PET/CT顯像：姜黃素治療8w結(jié)束后第二天，各組大鼠均行11C-CFT顯像，顯像結(jié)果示：生理鹽水對(duì)照組大鼠較術(shù)后無(wú)明顯變化，仍表現(xiàn)為右側(cè)基底節(jié)區(qū)放射性分布對(duì)稱，感興趣區(qū)(ROI)計(jì)數(shù)無(wú)明顯變化；模型組大鼠右側(cè)基底節(jié)區(qū)放射性計(jì)數(shù)較術(shù)后有所增加；姜黃素組大鼠右側(cè)紋狀體區(qū)攝取較前明顯增加，ROI計(jì)數(shù)有明顯升高。
　　2氧化應(yīng)激結(jié)果：生

7、理鹽水組和模型組比較，模型組大鼠GSH-PX、SOD活性明顯下降，MDA含量明顯升高，P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，認(rèn)為兩個(gè)組別間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；姜黃素組和模型組大鼠比較，姜黃素組大鼠GSH-PX、SOD活性升高，MDA含量有所下降，較生理鹽水對(duì)照組GSH-PX、SOD活性下降，MDA含量有所升高，P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，認(rèn)為兩個(gè)組別間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3病理學(xué)結(jié)果：將模型組與正常對(duì)照組相比，黑質(zhì)區(qū)的TH免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)目缺

8、失了約71%，有明顯的下降，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；姜黃素組與模型組相比，TH陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目明顯高于PD模型組(P<0.05)，但仍低于生理鹽水對(duì)照組的TH陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目(P<0.05)。
　　4高效液相色譜檢查：模型組大鼠紋狀體內(nèi)多巴胺神經(jīng)元(DA)的含量與生理鹽水對(duì)照組相比明顯下降，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；姜黃素組DA含量較PD模型組明顯增加(P<0.05)，其含量仍低于正常對(duì)照組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)