骨髓間充質干細胞移植調節(jié)煙霧吸入性損傷炎癥反應的實驗研究.pdf

1、目的：探討骨髓間充質干細胞的分離、培養(yǎng)、擴增及鑒定，分析移植后對兔煙霧吸入性損傷炎癥反應及對肺損傷修復的作用并探討其可能機制。
　　 方法：首先以全骨髓培養(yǎng)法分離、體外培養(yǎng)及擴增成兔MSCs，采用MTT方法測定培養(yǎng)細胞生長曲線，并用流式細胞術鑒定MSCs抗原表達。建立煙霧吸入性損傷模型，傷后立即進行MSCs移植。將72只健康新西蘭大耳白兔隨機分為正常對照組(C，n=8)：經(jīng)耳緣靜脈注入10mlPBS；煙霧吸入性損傷組(S，n=3

2、2)：傷后立即經(jīng)耳緣靜脈注入10mlPBS；煙霧吸入性損傷+MSCs移植組(M，n=32)：傷后立即經(jīng)耳緣靜脈注入10ml含有第三代MSCs(1.0×107)的PBS。S、M組動物均在致傷前及致傷后2h、4h、6h經(jīng)耳緣靜脈采血離心分離血漿封裝后凍存于-80℃冰箱中集中檢測血漿細胞因子。C組采血作對照。采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)方法檢測S組及M組致傷后2h、4h、6h(每個時間點各8只)及C組兔的血漿及肺組織勻漿液中TNF-α、IL

3、-1β、IL-6及IL-10的含量。S、M組動物均在致傷前及致傷后2h、4h、6h及24h分別活殺動物(每個時間點各8只)。分離右肺中葉用于測定肺水質量分數(shù)；右肺下葉10％甲醛固定用于病理學觀察。分離左肺制備勻漿。C組取肺組織測定濕/干比值和病理學觀察作為對照。
　　 結果：1、全骨髓培養(yǎng)法培養(yǎng)的原代MSCs接種4天后形態(tài)均勻成梭形，生長增殖迅速，7-8天MSCs融合接近80％，傳代培養(yǎng)生長良好。經(jīng)流式細胞術鑒定，CD34(-)

4、、CD45(-)、CD44(+)、CD105(+)，證明所培養(yǎng)的細胞為較純的MSCs。2、煙霧吸入性損傷后2h、4h、6h，外周血中各炎癥因子含量M組與相應S組對應時間點值相比均有顯著差異(P<0.05)。在肺組織勻漿液中，M組與S組對應各個時間點相比，各促炎癥因子含量均顯著降低(P<0.05)，而抗炎因子IL-10僅在4h、6h顯著升高(P<0.05)，在傷后2h無顯著差異(P>0.05)。3、病理學觀察：大體觀察：從顏色、外觀、包膜

5、緊張度、充血出血情況、滲出物等方面看，各時間點M組較S組顯著好轉，C組未見異常。組織病理學觀察：從充血出血情況、肺泡隔情況、肺水腫、脫落上皮細胞、炎癥細胞浸潤等方面看，各時間點M組較S組顯著好轉，C組結構正常。
　　 結論：1、MSCs移植能降低煙霧吸入性損傷早期促炎因子水平，升高抗炎因子水平，改善全身炎癥反應，對煙霧吸入性損傷肺組織具有一定的保護作用。2、經(jīng)過骨髓間充質干細胞治療干預的煙霧吸入性損傷兔病理改變有所減輕。3、免疫