2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩88頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)

文檔簡介

1、生物脫膠是以生物催化劑催化非纖維素物質(zhì)降解為核心而獲得滿足后續(xù)加工要求的纖維素纖維的加工過程,具有低能耗、低污染、低成本等優(yōu)點,不僅能有效解決產(chǎn)業(yè)“節(jié)能、減排、降耗”的突出問題,而且可以提升麻纖維可紡性和麻紗質(zhì)量,滿足紡紗的要求,是產(chǎn)業(yè)的發(fā)展方向。目前,生物脫膠主要采取菌脫膠的方式。因此,菌種的優(yōu)劣是關(guān)鍵。本研究從脫膠菌株DCE-01(Dickeya dadantii DCE-01)與BE-91(Bacillus.subtilis)中克

2、隆了果膠酶基因、木聚糖酶基因、甘露聚糖酶基因三種脫膠關(guān)鍵酶基因,利用生物信息學技術(shù)對基因的序列和結(jié)構(gòu)進行了模擬分析,用T4連接酶將引入特定酶切位點的不同基因組合以不同的排列順序串聯(lián)在表達載體上,分別轉(zhuǎn)入大腸桿菌與脫膠菌株中表達,采用分子生物學、生物化學、酶學等方法,比較分析各基因的表達規(guī)律,獲得如下主要結(jié)果:
  1.根據(jù)獲得的DCE-01全基因組序列和BE-91木聚糖酶基因序列,設(shè)計特異PCR引物,分別從兩個脫膠菌株中克隆到果膠

3、酶基因pel419(P,DCE-01),甘露聚糖酶基因man(M,DCE-01),木聚糖酶基因xyl(X,DCE-01)與91xyl(91X,BE-91),測序結(jié)果表明4個基因的核酸序列與原始序列一致。序列分析顯示4個基因序列全長分別為:1128 bp、1137 bp、1251bp、642 bp,編碼的氨基酸長度分別為375AA、378AA、416AA、213 AA;核苷酸序列與其他微生物來源的果膠酶基因、木聚糖酶基因、甘露聚糖酶基因核

4、苷酸序列的一致性在76%-100%之間;蛋白分子量在24.28-45.74kDa之間,等電點5.71-8.67之間;4個基因均含有信號肽,跨膜位點在第24-32個氨基酸位置之間。
  2.將DCE-01菌株的pel419、xyl、man基因與BE-91菌株的91xyl基因,分別按不同組合和順序串聯(lián)排列在載體pET28a(+)的MCS區(qū)域,成功構(gòu)建了6個生物脫膠多基因共表達質(zhì)粒28PXM、28MPX、28XMP、28PXM(91X)

5、、28MPX(91X)、28XMP(91X),并分別轉(zhuǎn)入大腸桿菌;轉(zhuǎn)化中間質(zhì)粒獲得帶有親本基因的對照菌株28P/BL21、28X/BL21、28M/BL21、28X(91X)/BL21。表達條件優(yōu)化后確定三種酶的最適底物分別為聚半乳糖醛酸、燕麥木糖、魔芋精粉,最佳培養(yǎng)條件為IPTG濃度1.0 mmol/L,轉(zhuǎn)速210 rpm,誘導時間21 h。SDS-PAGE電泳能較好的檢測到pel419、91xyl、man基因的蛋白條帶。平板法驗證獲

6、得了較好的木聚糖和甘露聚糖水解圈。
  3.用DNS法檢測6個多基因工程菌與4個親本基因工程菌三種關(guān)鍵酶酶活,數(shù)據(jù)表明:
  不同基因串聯(lián)順序中:果膠酶的表達活力在5.57-414.74 U/mL之間,木聚糖酶的表達活力在2.05-671.80 U/mL之間,甘露聚糖酶的表達活力在17.52-87601.32 U/mL之間?;蛟谳d體MCS區(qū)域中距啟動子越近則表達效率越高?;蛱幱诘?號位時約為第2號位時的1.57-52.4

7、9倍,處于第2位時約為排列第3位的1.42-23.40倍;第1至第2號位的遞減幅度大于第2至第3號位;遞減幅度也基因種類而異,表達活力越高,下降幅度越大。
  不同基因組合中:同屬木聚糖酶基因,91xyl基因的表達遠高于xyl基因,活力約為后者的30.52-146.36倍;91xyl基因?qū)el419、man基因的表達有較為明顯的促進作用。在相同的基因排列順序中,將xyl置換為91xyl后,果膠酶的表達增長為原來的1.93-5.3

8、2倍,甘露聚糖酶的表達增長為原來的4.07-29.70倍。另外,pel419、man、91xyl三個基因相互之間也有著較好的協(xié)同促進作用。
  4.對多基因工程菌株28PXM(91X)/B21及親本基因菌株28P/BL21、28M/BL21、28X(91X)/BL21分別進行酶學性質(zhì)檢驗,結(jié)果表明:28P/BL21的果膠酶、28X(91X)/BL21的木聚糖酶胞外酶活高于胞內(nèi)酶活,菌株28M/BL21中的甘露聚糖酶與菌株28PXM

9、(91X)/B21中的三種關(guān)鍵酶活力均為胞內(nèi)高于胞外。28PXM(91X)/BL21中各關(guān)鍵酶與親本基因菌株的熱穩(wěn)定性、酸堿耐受性表現(xiàn)趨勢基本一致,其中各關(guān)鍵酶在30℃-35℃時均能保證80%以上的酶活;同樣的pH區(qū)間內(nèi),各關(guān)鍵酶因所在菌株不同而對pH耐受能力各有不同。與親本基因菌株相比,NH4+、Zn2+、Pb2+和EDTA更能促進多基因重組菌28PXM(91X)/B21中果膠酶的活力表達;Ca2+、NH4+、Fe3+、Cu2+、K+

10、更能促進28PXM(91X)/B21中的木聚糖酶的酶活力提高,而Zn2+和Mn2+表現(xiàn)出抑制作用增強的效果;Pb2+可減弱對28PXM(91X)/B21中的甘露聚糖酶的抑制作用,EDTA、Mn2+與K+則表現(xiàn)為更為明顯的抑制作用。添加其余金屬離子后,親本單基因重組與多基因重組菌之間則沒有明顯變化。動力學方面,28PXM(91X)/BL21中的三種關(guān)鍵酶Km值約為對應(yīng)各親本基因菌株的0.67倍、0.53倍、0.63倍;Vm為對應(yīng)親本菌株的

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論