幾種抗病毒藥劑對煙草花葉病毒的抑制作用及相關(guān)機理研究.pdf

1、本文以煙草花葉病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)為防治對象,以普通煙草為模式植物,采用生物測定方法測定一些化學(xué)藥劑、寡糖、真菌多糖、藥用植物提取物對TMV的抑制作用,結(jié)果表明,五倍子的乙醇提取物(Gallis Phois,GP)、香菇多糖和中草藥單一組分DM002對TMV有明顯的抑制作用,其中五倍子乙醇提取物的抗病毒活性最高,通過對粗提物進行分離和生物活性測定,發(fā)現(xiàn)其中活性最高的成分為沒食子酸(Gallic aci

2、d,GA),并建立了五倍子提取物、香菇多糖與DM002混劑(AB)對TMV的誘導(dǎo)抗病體系,(1)用10％五倍子提取物噴施煙草幼苗,2d后接種TMV,對煙草花葉病毒病的防治效果達到82.48％;(2)用110μg/ml AB混劑噴施煙草幼苗,2d后接種TMV,與第一次用藥間隔7d后再用藥,對煙草花葉病毒病的防治效果達到70.02％。根據(jù)抗病體系,分別用10％五倍子提取物和110μg/ml AB混劑在田間進行防治番茄病毒病(TMV和CMV混

3、合侵染型)的示范試驗,防治效果分別為91.29％和73.04％,明顯高于常規(guī)對照藥劑20％病毒A可濕性粉劑的田間防效(61.55％)。
　　 香菇多糖、中草藥單一組分DM002和沒食子酸等抗病毒藥劑對煙草花葉病毒病TMV增殖具有明顯的抑制作用。用實時定量RT-PCR方法反轉(zhuǎn)錄合成病毒核酸(TMV-RNA),結(jié)果發(fā)現(xiàn)各試驗藥劑均可以在一定程度上抑制病毒核酸(TMV-RNA)的合成;用醋酸法提取TMV外殼蛋白亞基(TMV-CP),與

4、各藥劑混合后測定在10℃～39℃范圍內(nèi)的320nm吸光值,結(jié)果發(fā)現(xiàn)各試驗藥劑可以在不同程度上影響病毒外殼蛋白的體外聚合作用。由以上結(jié)果可知,沒食子酸不僅可有效抑制病毒核酸(TMV-RNA)的合成,還明顯影響病毒衣殼蛋白亞基(TMV-CP)的聚合,從而干擾病毒的正常組裝,有效地控制了病毒的復(fù)制。
　　 植物的保護反應(yīng)是復(fù)雜的新陳代謝結(jié)果,其生理反應(yīng)是通過酶催化活動來實現(xiàn)的。經(jīng)香菇多糖、中草藥單一組分和沒食子酸等抗病毒藥劑處理后的煙

5、草葉片中苯丙氨酸解氨酶(phenylalanineammonialyase,PAL)、過氧化物酶(peroxidase,POD)、幾丁質(zhì)酶(Endochitinase)、β-1,3葡聚糖苷酶(β-1,3-Glucanase)等酶活性均發(fā)生變化,一種植物蛋白--富含羥脯氨酸糖蛋白(hydroxyproline-richglycoprotein,HRGP)的含量隨之提高,而表現(xiàn)出對TMV的抗病性。因此,從植物生理生化學(xué)角度揭示了植物體內(nèi)對抗

6、病防御酶影響較大的抗病毒物質(zhì)--沒食子酸可以作為有效激發(fā)子,誘導(dǎo)寄主植物產(chǎn)生對植物病毒病的抗性。
　　 PR蛋白的產(chǎn)生被認為是植物產(chǎn)生誘導(dǎo)抗病性的生化機制之一,而PR1-α基因是植物產(chǎn)生系統(tǒng)誘導(dǎo)抗病性SAR的標志基因。利用聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE-SDS)方法檢測了胞間病程相關(guān)蛋白PRs的表達與煙草花葉病毒TMV在植物體內(nèi)增殖的關(guān)系,結(jié)果表明,沒食子酸可誘導(dǎo)煙草在受TMV侵染后的蛋白表達與正常植株沒有顯著差異,而香菇多糖和D