花椒葉黃酮的微波提取及其成分分析.pdf

1、花椒（Zanthoxylum bungeanum）是蕓香科花椒屬植物，主要分布于我國中南、西南及陜西、甘肅、山東、河北、江蘇、安徽等地，近年來自然災(zāi)害的頻繁發(fā)生導(dǎo)致花椒產(chǎn)量顯著下降而花椒葉卻大量留存，對來源如此豐富的花椒葉進(jìn)行全面的研究，提取其中可利用的活性成分，如對花椒葉黃酮提取、成分分析及其功能性進(jìn)行研究，進(jìn)而指導(dǎo)花椒葉保健食品和藥品的開發(fā)，具有一定的應(yīng)用價(jià)值。
　　 本課題的研究包括四個(gè)部分:
　　 (1)利用微波

2、輔助法提取花椒葉黃酮，考察了乙醇濃度、料液比、微波功率、提取溫度和時(shí)間五個(gè)因素對花椒葉黃酮得率的影響，結(jié)果表明，微波輔助法提取花椒葉黃酮的最佳條件是:溫度70℃、乙醇濃度65％、料液比1∶30、微波功率500 W、提取時(shí)間4 min，在此條件下，花椒葉黃酮的得率為7.64％。
　　 (2)通過靜態(tài)吸附法比較了八種大孔吸附樹脂的吸附和解吸性能，表明大孔吸附樹脂D101對花椒葉黃酮的純化效果最佳。采用動(dòng)態(tài)法對樣品液吸附流速、pH條件

3、、解吸液乙醇濃度和解吸流速進(jìn)行了研究，同時(shí)采用高效液相色譜法進(jìn)行分析表征了分離純化的效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，大孔吸附樹脂D101對花椒葉總黃酮的最佳吸附解吸條件為:樣品液pH為4，吸附流速為2 BV/h，解吸液60％乙醇，解吸流速2 BV/h，在此條件下，經(jīng)純化后花椒葉黃酮純度由23.2％提高到了56.4％。
　　 (3)以高效液相色譜分離、串聯(lián)四級桿質(zhì)譜負(fù)離子方式檢測，首次使用高效液相色譜-質(zhì)譜法（HPLC-MS/MS）對花椒葉黃

4、酮的成分進(jìn)行了定性及定量分析。根據(jù)相對分子質(zhì)量、二級質(zhì)譜碎片等信息鑒定出九種黃酮類及三種酚酸類成分，利用外標(biāo)法及內(nèi)標(biāo)法對其進(jìn)行定量，分別為:山奈酚-3-蕓香糖苷(16.84μg/g)、表兒茶素(92.74μg/g)、槲皮素-3-蕓香糖-7-鼠李糖苷(29.55μg/g)、芹菜素-8-C-阿拉伯糖苷(40.89μg/g)、牡荊素(87.28μg/g)、蘆?。?90.37μg/g）、金絲桃苷（230.35μg/g）、槲皮苷(2347.97μ

5、g/g)、山奈酚-7-鼠李糖苷(270.63μg/g)、奎寧酸（44.40μg/g）、綠原酸(3133.67μg/g)和5-阿魏酰奎寧酸(16.84μg/g)。
　　 (4)以人結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29細(xì)胞和DCFH-DA熒光探針為媒介，采用細(xì)胞模型法初步探索了花椒葉黃酮的細(xì)胞內(nèi)抗氧化活性。通過化學(xué)測定法比較了了花椒葉黃酮和合成抗氧化劑Vc的總抗氧化能力和清除自由基能力。結(jié)果表明，花椒葉黃酮在1.0mg/mL的濃度范圍內(nèi)對HT-29