約氏不動桿菌產(chǎn)低溫堿性脂肪酶的分離純化和菌株改造.pdf

1、脂肪酶是一種特殊的酯鍵水解酶，它可作用于甘油三酯的酯鍵，使甘油三酯降解為甘油二酯、單甘油酯、甘油和脂肪酸，還能催化水解脂、進(jìn)行酯交換、酯合成等反應(yīng)，廣泛應(yīng)用于油脂加工、食品、醫(yī)藥、日化等工業(yè)，是重要的工業(yè)用酶之一。低溫堿性脂肪酶可在低溫與常溫下較好地發(fā)揮活性，在洗滌劑工業(yè)有良好的應(yīng)用前景。本課題對實驗室保藏的脂肪酶產(chǎn)生菌株Acinetobacter johnsonii G23的發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行了優(yōu)化，使其更適合后期的分離純化，并采用離子交

2、換層析對A.johnsonii G23產(chǎn)脂肪酶進(jìn)行了分離純化，優(yōu)化了該脂肪酶純化工藝條件，并得到相關(guān)純化酶，為獲得其氨基酸序列以及其定向改造和構(gòu)效關(guān)系研究奠定了基礎(chǔ)，同時還研究了該脂肪酶的基本酶學(xué)性質(zhì)，并通過離子誘變的手段提高菌株產(chǎn)酶活力。
　　對A.johnsonii G23優(yōu)化后的發(fā)酵培養(yǎng)基成分為(w/v):可溶性淀粉1％、大豆蛋白胨1.5％、K2HPO40.4％、MgSO40.04％、CaCl20.05％、PVA-大豆油2％

3、、pH8.5。同時對A.johnsonii G23所產(chǎn)脂肪酶進(jìn)行了分離純化，發(fā)酵液經(jīng)過離心、抽濾、硫酸銨沉淀、透析、超濾管濃縮、Hitrap Q HP陰離子交換層析等步驟處理后，SDS-PAGE電泳確定酶分子量為40kDa左右，比活力達(dá)90.25U/mg，純化倍數(shù)達(dá)29.59倍，回收率達(dá)到13％。A.johnsonii G23所產(chǎn)脂肪酶酶學(xué)性質(zhì)研究顯示確定該脂肪酶最適作用溫度是25℃，最適作用pH為8.0，屬于低溫堿性脂肪酶;熱穩(wěn)定性和