約氏不動(dòng)桿菌產(chǎn)低溫堿性脂肪酶的分離純化和菌株改造.pdf_第1頁(yè)
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1、脂肪酶是一種特殊的酯鍵水解酶,它可作用于甘油三酯的酯鍵,使甘油三酯降解為甘油二酯、單甘油酯、甘油和脂肪酸,還能催化水解脂、進(jìn)行酯交換、酯合成等反應(yīng),廣泛應(yīng)用于油脂加工、食品、醫(yī)藥、日化等工業(yè),是重要的工業(yè)用酶之一。低溫堿性脂肪酶可在低溫與常溫下較好地發(fā)揮活性,在洗滌劑工業(yè)有良好的應(yīng)用前景。本課題對(duì)實(shí)驗(yàn)室保藏的脂肪酶產(chǎn)生菌株Acinetobacter johnsonii G23的發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行了優(yōu)化,使其更適合后期的分離純化,并采用離子交

2、換層析對(duì)A.johnsonii G23產(chǎn)脂肪酶進(jìn)行了分離純化,優(yōu)化了該脂肪酶純化工藝條件,并得到相關(guān)純化酶,為獲得其氨基酸序列以及其定向改造和構(gòu)效關(guān)系研究奠定了基礎(chǔ),同時(shí)還研究了該脂肪酶的基本酶學(xué)性質(zhì),并通過離子誘變的手段提高菌株產(chǎn)酶活力。
  對(duì)A.johnsonii G23優(yōu)化后的發(fā)酵培養(yǎng)基成分為(w/v):可溶性淀粉1%、大豆蛋白胨1.5%、K2HPO40.4%、MgSO40.04%、CaCl20.05%、PVA-大豆油2%

3、、pH8.5。同時(shí)對(duì)A.johnsonii G23所產(chǎn)脂肪酶進(jìn)行了分離純化,發(fā)酵液經(jīng)過離心、抽濾、硫酸銨沉淀、透析、超濾管濃縮、Hitrap Q HP陰離子交換層析等步驟處理后,SDS-PAGE電泳確定酶分子量為40kDa左右,比活力達(dá)90.25U/mg,純化倍數(shù)達(dá)29.59倍,回收率達(dá)到13%。A.johnsonii G23所產(chǎn)脂肪酶酶學(xué)性質(zhì)研究顯示確定該脂肪酶最適作用溫度是25℃,最適作用pH為8.0,屬于低溫堿性脂肪酶;熱穩(wěn)定性和

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