產(chǎn)低溫堿性脂肪酶菌株的篩選及酶學(xué)性質(zhì)研究.pdf

1、本論文從渤海灣鹽堿地被油污染的土樣中篩選出一株產(chǎn)低溫堿性脂肪酶的菌株34-5，對(duì)該菌株的產(chǎn)酶發(fā)酵培養(yǎng)基、發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化，并對(duì)菌株34-5所產(chǎn)脂肪酶的純化工藝和酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了研究。
　　 以橄欖油為唯一碳源，在25℃和pH9.6的低溫堿性條件下，分離出354株脂肪酶產(chǎn)生菌。采用平板擴(kuò)散方法定性檢測(cè)酶活，通過改變平板的pH值和平板反應(yīng)溫度，篩選出51株產(chǎn)堿性脂肪酶的菌株，8株產(chǎn)低溫堿性脂肪酶，其中菌株34-5所產(chǎn)脂肪酶的最適溫度

2、為25℃，最適pH為9.6。該菌的16S rDNA基因序列與洋蔥伯克霍爾德氏菌(Burkholderia cepacia)的同源性為99％。
　　 搖瓶實(shí)驗(yàn)表明，菌株34-5最適產(chǎn)酶培養(yǎng)基為(g/L)：淀粉10，黃豆餅粉20，玉米漿20，K2HPO41，聚乙烯醇大豆油乳化液20，最適產(chǎn)酶溫度28℃，最佳產(chǎn)酶pH9.0，發(fā)酵44 h達(dá)到產(chǎn)酶高峰，低溫堿性脂肪酶的酶活達(dá)到7.67 U/mL。
　　 對(duì)菌株34-5產(chǎn)的低溫堿性

3、脂肪酶進(jìn)行了分離純化，菌體發(fā)酵液經(jīng)過離心、硫酸銨沉淀、DEAE-52離子交換和Sephadex G-75凝膠過濾等步驟處理，經(jīng)電泳檢測(cè)達(dá)到電泳純。
　　 對(duì)菌株34-5所產(chǎn)脂肪酶進(jìn)行酶學(xué)性質(zhì)研究，該酶的最適溫度和pH為30℃，pH9.0，該酶在10、15、20和25℃時(shí)分別保持63、66、74和95％的活性。洗滌劑、檸檬酸鈉、牛黃膽酸鈉、甘氨酸和NaCl等溶劑對(duì)該脂肪酶的激活作用較強(qiáng)；TritonX-100，Tween-20，T