產(chǎn)堿性脂肪酶菌株Aspergillus awamori HB-03的篩選與鑒定及脂肪酶酶學性質的研究.pdf

1、脂肪酶是一類能催化水解長鏈三酰甘油脂的酶,是目前最重要的工業(yè)酶之一。隨著酶生物技術的迅速發(fā)展,微生物脂肪酶已成為全世界熱門研究的課題。目前,微生物脂肪酶的應用范圍已經(jīng)由最初的食品加工、洗滌、制革行業(yè)擴展到化妝品、生物柴油、醫(yī)藥、環(huán)境等眾多工業(yè)和科研領域上。
　　 本文從富含油脂的樣品中篩選到一株產(chǎn)脂肪酶的真菌HB-03,并對其進行了形態(tài)學和分子生物學鑒定;對該菌株的產(chǎn)酶條件進行了優(yōu)化;對脂肪酶進行了分離純化,同時對其酶學性質做了

2、初步的研究。
　　 (1)來源于長沙各地富含油脂的樣品經(jīng)富集培養(yǎng)后,采用平板水解圈法進行初篩,得到18株可在以橄欖油為唯一碳源的油脂同化培養(yǎng)基上生長且形成明顯水解圈的菌株,對這些株菌進行復篩,獲得一株產(chǎn)酶活力相對較高的菌株HB-03。
　　 (2)利用形態(tài)學和分子生物學手段對該菌株進行了鑒定,通過對其菌落特征、個體形態(tài)的觀察和18S rDNA序列分析,最終確定該菌株為泡盛曲霉(Aspergillus awamori)。<

3、br>　　 (3)通過對HB-03菌株的培養(yǎng)條件及初始產(chǎn)酶培養(yǎng)進行優(yōu)化,發(fā)現(xiàn)了HB-03菌株的在以1％的橄欖油為誘導物,0.5％的蔗糖為碳源,2％的蛋白胨和0.5％的酵母粉為復合有機氮源,0.1％(NH4)2SO4為無機氮源,pH為7.0的培養(yǎng)基中,于30℃,180 rpm的搖床培養(yǎng)36 h,可達最大酶產(chǎn)量—(45.9±2.3)U/mL。
　　 (4)Aspergillus awamori HB-03胞外脂肪酶經(jīng)90％硫酸銨沉

4、淀、Sephadex G-75凝膠過濾純化,純化倍數(shù)和回收率分別為10.6和18.84％,經(jīng)p-NPP比色法測得該酶的比活為1862.2 U/mg。SDS-PAGE顯示該脂肪酶分子量約為68 kDa。
　　 (5)對純化的脂肪酶進行酶學性質研究發(fā)現(xiàn),純化酶的最適作用pH和最適作用溫度分別為8.5和40℃,該酶具有一定的熱穩(wěn)定性,在pH7.0-9.0范圍內穩(wěn)定性也較好;Cu2+,Fe3+和Mg2+在濃度為1mmol/L,時就可以抑

5、制酶的活性,其中Cu2+對脂肪酶活性的抑制作用最大;CTAB和SDS強烈抑制純化酶的活性,而EDTA對其影響非常微弱;純化脂肪酶對底物p-NPP酶動力學常數(shù)Km值和Vmax分別是0.13 mmol/L和60.6 mmol/L/min。
　　 綜上所述,分離自長沙各地富含油脂的樣品的Aspergillusawamori HB-03是一株堿性脂肪酶的高產(chǎn)菌株;對分離純化自該菌株的堿性脂肪酶的酶學性質研究表明,該酶具有很好的應用前景。