29596.低溫脂肪酶的篩選、純化及特性研究

1、福建師范大學(xué)碩士學(xué)位論文低溫脂肪酶的篩選、純化及特性研究姓名：施文芳申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：林琳20090601中文文摘中文文摘脂肪酶即三酰基甘油?；饷?，它能催化天然底物油脂水解，生成脂肪酸甘油和甘油單酯或二酯。共有60多個(gè)屬100多種(細(xì)菌有28個(gè)屬、放線菌4個(gè)屬、酵母菌10個(gè)屬、其它真菌23個(gè)屬等65個(gè)屬)的微生物可以產(chǎn)生脂肪酶。但不同微生物來源的脂肪酶具有不同的催化特點(diǎn)和催化活力。低溫脂肪酶在低溫

2、下有很好的催化活性，在工業(yè)和生物技術(shù)領(lǐng)域有巨大的應(yīng)用前景，如做為有機(jī)合成敏感化合物的催化劑，在低溫環(huán)境下有效催化有機(jī)合成，在低溫環(huán)境修復(fù)也有很好的作用等。低溫脂肪酶在洗滌業(yè)、食品工業(yè)、藥物合成、生物轉(zhuǎn)化、分子生物學(xué)應(yīng)用等領(lǐng)域有廣泛應(yīng)用前景。作者從福建某農(nóng)場(chǎng)取樣，樣品經(jīng)4“C預(yù)處理樣品一周后稀釋涂布于三丁酸甘油酯平板篩選脂肪酶產(chǎn)生菌。經(jīng)過搖瓶復(fù)篩獲得8株脂肪酶產(chǎn)生菌。通過分析16srDNA序列然后構(gòu)建16S進(jìn)化樹對(duì)菌株進(jìn)行屬種鑒定。結(jié)果顯

3、示RTl、IH3、RT7、RTl9、LT4為假單胞菌屬，而RT4、RT6、RT9與UnculturedAcinetobactersp(AMl574481)分類地位相近，為醋酸不動(dòng)桿菌屬。8株脂肪酶都在堿性條件下有較高的酶活，RTl、RT3、RT4、RT7、RT9、LT4等脂肪酶適宜溫度為25℃左右，RT6、RTl9兩株脂肪酶適宜溫度為35℃。其中一株RT7為堿性脂肪酶產(chǎn)生菌，并對(duì)其發(fā)酵條件碳氮源成分進(jìn)行了優(yōu)化，該菌的發(fā)酵液經(jīng)50％硫銨沉

4、淀、透析、除鹽，經(jīng)DEAE—Sepharose及SephacrylS一100等層析技術(shù)方法分離獲得純化的脂肪酶(簡(jiǎn)稱PL7)。：SDSPAGE電泳顯示PL7的純化己達(dá)到電泳純，初步研究了溫度、pH對(duì)該酶的影響，酶的穩(wěn)定性，酶的抑制劑和激活劑，酶的催化必需基團(tuán)，酶的底物特異性等理化性質(zhì)。RT7是一株產(chǎn)酶較高的堿性脂肪酶產(chǎn)生菌，通過對(duì)其培養(yǎng)基的優(yōu)化使得產(chǎn)酶能力從141U／ml提高到31U／ml，提高了約120％。優(yōu)化后培養(yǎng)基配方：豆餅粉3O