I型單純皰疹病毒去泛素化酶UL36USP逃逸DNA受體識(shí)別信號(hào)通路的分子機(jī)制.pdf

1、天然免疫信號(hào)通路通過模式識(shí)別受體識(shí)別病原相關(guān)分子模式抵抗病原微生物入侵。當(dāng)DNA病毒入侵時(shí)，DNA識(shí)別受體識(shí)別病毒雙鏈DNA并介導(dǎo)天然免疫反應(yīng)，其中NF-κB信號(hào)通路發(fā)揮重要作用。泛素化是一種廣泛存在的蛋白質(zhì)翻譯后修飾，參與很多重要生命過程，如信號(hào)傳導(dǎo)、蛋白質(zhì)降解及免疫應(yīng)答反應(yīng)等。多種病毒編碼的去泛素化酶（deubiquitinase，DUB）可通過調(diào)控宿主蛋白的泛素化來干擾宿主抗病毒應(yīng)答。人類I型單純皰疹病毒（herpes simpl

2、ex virus type1，HSV-1）是一種線性雙鏈DNA病毒，在人群中極為常見，可導(dǎo)致口唇皰疹、角膜結(jié)膜炎、腦炎等疾病。HSV-1編碼皮層蛋白UL36，其蛋白氨基端的去泛素化酶結(jié)構(gòu)域，稱為UL36USP，目前UL36USP干擾宿主抗病毒天然免疫信號(hào)通路的機(jī)制尚不清楚。
　　本文通過雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)結(jié)合多種分子生物學(xué)、免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)及利用細(xì)菌人工染色體技術(shù)構(gòu)建的突變病毒，研究HSV-1 UL36USP干擾宿主DNA受

3、體信號(hào)通路的分子機(jī)制，以闡明 UL36USP在 HSV-1致病機(jī)制中的作用，為防治皰疹病毒尋找新的藥物靶點(diǎn)及研發(fā)新型藥物和疫苗奠定理論基礎(chǔ)。細(xì)胞質(zhì)DNA受體cGAS（cyclic GMP-AMP synthase）識(shí)別外源DNA，利用STING（stimulator of interferon gene）介導(dǎo)的下游信號(hào)通路能顯著抑制HSV-1的復(fù)制。本研究發(fā)現(xiàn)，外源表達(dá)的UL36USP可以抑制ISD（interferon stimula

4、tory DNA）激活的干擾素β（interferon-β，IFN-β）的轉(zhuǎn)錄。雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)顯示，UL36USP可以抑制cGAS和STING激活的IFN-β和NF-κB的啟動(dòng)子活性。同時(shí)，UL36USP可以抑制超表達(dá)STING、TBK1（TANK-binding kinase1）、IKKα（IκB kinaseα）、IKKβ激活的 NF-κB啟動(dòng)子活性，但不能抑制 p65激活的 NF-κB啟動(dòng)子活性，這說明UL36USP對(duì)NF

5、-κB通路的抑制水平在IKK和p65之間。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，UL36USP可以去泛素化IκBα抑制IκBα降解，從而抑制NF-κB激活。接下來我們用缺失了去泛素化酶活性的重組病毒（C40A HSV-1）來驗(yàn)證UL36USP的作用，發(fā)現(xiàn)C40A HSV-1不能去泛素化IκBα，且感染C40A HSV-1的細(xì)胞，其IFN-β產(chǎn)生量明顯高于野生型（WT）HSV-1。這些結(jié)果表明，在DNA受體信號(hào)通路中，UL36USP利用其去泛素化酶結(jié)構(gòu)域，通過