葛根異黃酮的發(fā)酵提取工藝及其抗氧化性研究.pdf

1、葛根為豆科葛屬植物野葛（Pueraria lobata（Wild.）Ohwi）的根，屬于“藥食同源”植物，主要成分為纖維素、淀粉、異黃酮類化合物以及豐富的礦質(zhì)元素等，其中葛根異黃酮（Radix pueraria isoflavones，RPI）為其主要功能性成分。RPI是一類植物雌激素，具有改善心腦血管代謝機(jī)能、抗衰老、抗癌、抗疲勞、抗氧化、增強(qiáng)機(jī)體免疫力以及解酒保肝等多種功能。葛根素（Puerarin）占RPI總量的50％以上，常被用

2、作評(píng)價(jià)葛根品質(zhì)的指標(biāo)，并已廣泛用于臨床。本文考察了HPLC測(cè)定發(fā)酵液中葛根素的方法；以葛根為培養(yǎng)基主要原料，篩選適合發(fā)酵法提取RPI的菌種，優(yōu)化了培養(yǎng)基組分及培養(yǎng)條件；采用大孔樹脂對(duì)發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行純化，比較了不同提取方法所得RPI的抗氧化活性。研究結(jié)果如下：
　　 1、對(duì)HPLC測(cè)定發(fā)酵液中葛根素含量的方法進(jìn)行考察，結(jié)果表明此法穩(wěn)定性好，精密度和加標(biāo)回收率均較高，葛根素含量在40～200μg/mL之間線性相關(guān)（R2=0.9996）

3、，適用于發(fā)酵液中葛根素含量的測(cè)定。
　　 2、以葛根素提取量為指標(biāo)，篩選后確定米根霉-酵母混合菌為最適發(fā)酵菌種；采用Plackett-Burman試驗(yàn)分析液料比、氮源和無機(jī)鹽等因素對(duì)RPI產(chǎn)量的影響，其中液料比、蛋白胨和KH2PO4具有顯著正效應(yīng)，通過響應(yīng)面試驗(yàn)對(duì)其進(jìn)行水平優(yōu)化。結(jié)果表明，液料比30:1、蛋白胨8.49g/L、KH2PO46.89g/L時(shí)，RPI和葛根素提取量分別可達(dá)到31.98和16.18 mg/g·DW。

4、r>　　 3、考察了糖化溫度、后發(fā)酵溫度、培養(yǎng)基初始pH、接種比例、裝液量等因素對(duì)RPI提取量的影響；在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，以RPI為指標(biāo)，采用響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)，對(duì)培養(yǎng)基初始pH、裝液量和糖化溫度進(jìn)行了優(yōu)化，得到最佳培養(yǎng)條件為：初始pH6.88、裝液量80 mL、糖化溫度36.2℃、后發(fā)酵溫度28℃、接種比例6％：6％，在此條件下RPI和葛根素提取量分別可達(dá)到40.29和18.36 mg/g·DW。
　　 4、比較了不同極性大孔