桃果實PpCuZnSOD、PpEXP和PpPIP1基因的克隆與表達分析.pdf

1、MolecularCloning1H’r’andExpresslon0tPpCuZnSODPpEXPandPpPIP1GenesofPrunuspersicaFruitThesissubmittedtongdaoAgrkulturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofAgronomyWuJunshuai(DepartmentofAgronomy)Su

2、pervisor：LiPeihuanDuanYanxinQingdaoChmaJune，2013青島農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文中文摘要摘要jtJor究以硬肉桃新品種‘雙久紅’為試材，以常規(guī)品種‘川中島白桃’為對照，通過對不同時期及不同外源激素處理的果實硬度及乙烯釋放量的研究和桃果實PpCuZnSODeprⅨP和助P伊』基因的克隆與表達分析，旨在探清硬肉桃果實成熟后變軟慢的分子機制，為桃新品種的選育和推廣，全面提高桃樹栽培的經(jīng)濟效益提供理論依據(jù)

3、。試驗研究結果如下：乙烯弄J(50mg／L)、NAA(50mg&)和ABA(50mg／L)3種外源激素處理能促進‘雙久紅’果實的軟化，而在‘川中島白桃’果實中只有乙烯利和NAA作用較明顯；乙烯利和ABA處理促進了‘川中島白桃’乙烯釋放高峰提前到來，NAA處理則使峰值增大，在‘雙久紅’中乙烯利和NAA提高了乙烯的釋放量，而ABA卻完全抑制了乙烯的釋放。本試驗獲得了全長665bp，編碼152個氨基酸的桃果實銅鋅超氧化物歧化酶基因PpCuZn

4、SOD全長cDNA序列(GenBank登錄號：JX217743)，在此基礎上，成功構建了該基因的原核表達載體pET32a()PpCuZnSOD，并在大腸桿菌中得到高效表達，層析純化后獲得活性為523103U／nag，pr0的CuZnSOD酶。熒光定量RTPCR結果表明：成熟前后20d過程中PpCuZnSOD基因在成熟后表達量高于成熟前，且在‘雙久紅’中的表達豐度顯著高于‘JIl中島白桃’的，該基因組織特異性不顯著；在‘J|l中島白桃’中

5、，NAA處理在前期有基因表達高峰，乙烯利處理的高峰出現(xiàn)在后期且高于NAA處理的，ABA則明顯抑制了該基因的表達，在‘雙久紅’中，對基因表達影響最大的乙烯利處理，其次為NAA處理，ABA處理無顯著影響。獲得了全長1142bp，編碼252個氨基酸的桃果實擴展蛋白基因ep戤7的全長cDNA序列，在此基礎上，成功構建了該基因的原核表達載體pET32a()epEXe，并在大腸桿菌中得到表達。熒光定量RT—PCR結果表明：成熟期前后PpF_XP基因

6、出現(xiàn)兩個表達高峰，并且在幼果中的表達量高于其他組織器官；在‘川中島白桃’中，該基因表達逐漸下降，乙烯利處理能夠促進基因表達，在‘雙久紅’中，乙烯利和NAA能夠明顯促進基因表達，ABA對該基因的表達無顯著影響。獲得了全長1163bp，編碼290個氨基酸的桃果實水通道蛋白基因聊J全長cDNA序列(GenBank登錄號：JX317646)，在此基礎上，成功構建了該基因的原核表達載體pET32a()一印P口J。熒光定量RTPCR結果表明：成熟前