查爾酮類衍生物的合成及其對乙酰膽堿酯酶作用的初步研究.pdf

1、阿爾茨海默病(Alzheimerdisease，AD)，即老年性癡呆癥，是較為常見的神經(jīng)衰退病癥，患者的主要癥狀是認(rèn)知功能、視空間功能、記憶功能等出現(xiàn)障礙，導(dǎo)致個人生活能力、社會能力和情感人格等明顯降低。到目前為止，“膽堿能缺失學(xué)說”仍是AD最為廣泛接受的病理學(xué)說。此學(xué)說認(rèn)為AD的關(guān)鍵病因是患者大腦內(nèi)乙酰膽堿的缺失，導(dǎo)致神經(jīng)興奮無法正常傳遞，目前，依據(jù)此學(xué)說研發(fā)的擬膽堿藥物仍是臨床治療AD的主要藥物。
　　查爾酮是一種具有多種生物

2、活性的天然產(chǎn)物，其柔性結(jié)構(gòu)使其能較好地結(jié)合生物大分子，我們結(jié)合“膽堿能缺失學(xué)說”發(fā)病機(jī)理、乙酰膽堿的結(jié)構(gòu)特點及擬膽堿藥設(shè)計原理，首先對卡瓦胡椒素B含氮衍生物進(jìn)行了體外生物活性初步研究，然后根據(jù)活性篩選結(jié)果，為進(jìn)一步探索構(gòu)效關(guān)系，我們采用簡化結(jié)構(gòu)法，設(shè)計并合成了一系列不同鏈長的含氮查爾酮衍生物，并對其生物活性進(jìn)行初步的探討，以期能夠篩選出對乙酰膽堿酯酶具有高抑制作用的化合物。
　　本論文包括以下幾方面的內(nèi)容:
　　(1)對羥胺

3、三氯化鐵法和Ellman法進(jìn)行了優(yōu)化對比，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Ellman法具有靈敏度高，用酶量少，直接作用于反應(yīng)產(chǎn)物的顯色方式等優(yōu)點。
　　(2)使用優(yōu)化的Ellman法篩選了卡瓦胡椒素B含氮衍生物對乙酰膽堿酯酶的活性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與母體化合物卡瓦胡椒素B相比，其衍生物對乙酰膽堿酯酶均有一定的抑制活性，其中化合物A6對乙酰膽堿酯酶的抑制活性最強(qiáng)，IC50值達(dá)到了4.15μM，接近利斯的明的兩倍，化合物A2、A3、A5、A8也均具有較高活性，其I

4、C50分別為18.8、15.1、16.1、12.4μM;然后，將具有較高活性的化合物A2、A3、A5、A6、A8進(jìn)行酶動力學(xué)實驗，研究其與酶抑制作用的機(jī)理，結(jié)果發(fā)現(xiàn)它們對乙酰膽堿酯酶均表現(xiàn)為混合型抑制作用;采用MOE2008軟件對化合物A1～A8進(jìn)行了分子對接實驗，探索小分子化合物與乙酰膽堿酯酶在分子水平上的結(jié)合方式，分子模擬結(jié)果表明較高活性的化合物A2、A3、A5、A6、A8均能與酶催化中心(CAS)和外周活性位點(PAS)同時結(jié)合，

5、為雙位點酶抑制劑，并證明了酶動力學(xué)實驗的結(jié)論。
　　(3)為探究含氮卡瓦胡椒素B衍生物透血腦屏障的能力，采用搖床法結(jié)合HPLC法對其油水分布系數(shù)(logP)進(jìn)行了測定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)此類衍生物的logP值都存在于最適中樞神經(jīng)系統(tǒng)值(2.0±0.7)之間，可初步預(yù)測其具有較好的透血腦屏障能力。
　　(4)為進(jìn)一步探究構(gòu)效關(guān)系，根據(jù)簡化結(jié)構(gòu)法設(shè)計合成了一系列不同鏈長的含氮查爾酮衍生物，并利用1HNMR，紅外等手段進(jìn)行了結(jié)構(gòu)表征。

6、>　　(5)使用Ellman法篩選了含氮查爾酮類衍生物對AChE的活性，測定結(jié)果表明該類衍生物均對乙酰膽堿酯酶具有一定的抑制活性，其中鏈長為4時，化合物活性表現(xiàn)最高，含氮取代基對活性的影響為吡啶環(huán)、四氫吡咯環(huán)要高于直鏈的二甲氨基和二乙氨基，其中化合物B5c對乙酰膽堿酯酶的IC50值達(dá)到了0.85μM，其次是化合物B5d，對乙酰膽堿酯酶的IC50為1.42μM，高于最高抑制活性的卡瓦胡椒素B衍生物A6。同時通過酶動力學(xué)實驗研究最高活性的化