T-2毒素誘導凡納濱對蝦肌肉品質典型性狀的變化規(guī)律.pdf

1、T-2毒素是單端孢霉烯族真菌毒素中毒性最強的一種，廣泛存在飼料中，不僅通過水產(chǎn)食物鏈蓄積引發(fā)食品安全問題，更重要的是導致對蝦品質變化，從而造成對蝦產(chǎn)業(yè)的產(chǎn)量下降和經(jīng)濟效益受損。但是目前仍缺乏T-2毒素對凡納濱對蝦肌肉品質影響的評價指標。因此，本研究以T-2毒素誘導的凡納濱對蝦為研究對象，探明T-2毒素誘導的凡納濱對蝦肌肉品質變化的典型性狀指標及其變化規(guī)律。
　　本論文實驗分四部分，⑴染毒技術的建立：通過不同方式將 T-2毒素添加到

2、對蝦飼料中，并采用 LC-MS/MS檢測 T-2毒素毒餌料的包埋率和載毒量，從而確定毒餌料的制備方法；通過急性毒性實驗得到T-2毒素對凡納濱對蝦的口服LD50；⑵從酶學角度出發(fā)，研究T-2毒素急性誘導凡納濱對蝦肌肉的Ca2+-ATPase和多酚氧化酶（PPO）的變化規(guī)律，從而確定T-2毒素的安全范圍和有效量范圍，為T-2毒素限量標準提供理論依據(jù)和參考；根據(jù)T-2毒素對凡納濱對蝦肌肉的病理切片的觀察，初步了解T-2毒素對凡納濱對蝦肌肉的損

3、傷情況；⑶根據(jù)LD50進行T-2毒素蓄積毒性的劑量分組，分別分為對照組，添加0.5、1.2、2.4、4.8、12.2ppm(mg·kg-1·飼料) T-2毒素的五個試驗組，喂養(yǎng)20天，研究飼料中添加T-2毒素對凡納濱對蝦機體生長狀況、肌肉化學成分、肌肉酶學指標和肌肉感官品質的影響；⑷通過灰色關聯(lián)度分析方法找出T-2毒素對凡納濱對蝦作用后的肌肉品質典型性狀，并擬合出典型性狀隨飼料中T-2毒素劑量變化的劑量-效應關系曲線，得到T-2毒素對各

4、典型性狀的半數(shù)效應量（ED50），一方面從檢測品質上提供 T-2毒素污染評價指標，另一方面從 T-2毒素限量標準上提供理論依據(jù)和參考。主要結果如下：
　　1.分別采用標液揮干、標液和標液加水三種方式將T-2毒素添加到對蝦飼料中，結果T-2毒素在飼料中的包埋率分別為84.95％、0%和65.32%，所以最終確定采用標液揮干的方式將T-2毒素添加到對蝦飼料中；飼料中分別添加10、20、40、80、160ppm(mg·kg-1·飼料)

5、T-2毒素，投放到對蝦養(yǎng)殖環(huán)境中24h后吸出殘渣并取養(yǎng)殖水，測得樣品中毒素含量，發(fā)現(xiàn)飼料中T-2毒素在80ppm以內，載毒量穩(wěn)定；通過T-2毒素對凡納濱對蝦急性毒性實驗發(fā)現(xiàn)，凡納濱對蝦的死亡數(shù)量不與T-2毒素劑量呈線性關系，說明凡納濱對蝦對T-2毒素的易感性不一致，通過T-2毒素劑量與凡納濱對蝦死亡率關系的擬合曲線得到T-2毒素對凡納濱對蝦7d的口服LD50為1.2162mg·kg-1·bw。
　　2.根據(jù)凡納濱對蝦肌肉Ca2+-

6、ATPase活性與T-2毒素劑量的劑量-效應曲線，得到T-2毒素的ED50為3.22mg·kg-1·bw，ED95為7.52 mg·kg-1·bw，ED99為7.96 mg·kg-1·bw，SF為0.03 mg·kg-1·bw，CSF為0.02 mg·kg-1·bw；同樣地，根據(jù) PPO活性與 T-2毒素劑量的劑量-效應曲線，得到 T-2毒素的ED50為0.05mg·kg-1·bw，ED95為2.40mg·kg-1·bw，ED99為8.

7、00 mg·kg-1·bw，SF為0.08 mg·kg-1·bw，CSF為0.02 mg·kg-1·bw；綜上可知，低劑量時，肌肉的PPO活性對T-2毒素更為敏感，而高劑量時，肌肉的Ca2+-ATPase對T-2毒素敏感性更高，并且確定安全系數(shù)CSF均為0.02 mg·kg-1·bw；從肌肉橫縱切面圖可以看出，T-2毒素低劑量時，肌肉的肌節(jié)間隙相對于對照組變小，肌纖維也更平整，T-2毒素高劑量時，肌肉肌節(jié)變大，肌纖維小片化嚴重，最后呈溶

8、融狀態(tài)。
　　3.⑴從機體性能看，T-2毒素對凡納濱對蝦的體重和肌肉重影響極顯著，對體長、含肉率影響顯著，而對肝胰腺重和肝重比影響不顯著；⑵從肌肉感官指標看，T-2毒素對凡納濱對蝦肌肉的感官評價、質構特性、色差屬性和蒸煮損失影響均不顯著；從肌肉組織的電鏡觀察可知，T-2毒素能使肌纖維Z帶、I線溶解，肌纖維小片化，最后呈現(xiàn)溶融狀態(tài)；肌肉組織的病理切片變化形態(tài)與急性毒性組織樣本的變化形態(tài)相類似，說明凡納濱對蝦受到T-2毒素污染后肌肉組

9、織會進行多次修復，直至肌肉組織被T-2毒素完全破壞；由SDS-PAGE可知，0.5ppm和12.2ppmT-2毒素會誘導凡納濱對蝦產(chǎn)生新蛋白，分子量在55KDa-70KDa、35KDa-40KDa；⑶從肌肉的化學組成看，T-2毒素對凡納濱對蝦肌肉的粗蛋白、巰基、膠原蛋白含量影響極顯著，對灰分含量影響顯著，而對水分含量和粗脂肪含量影響不顯著；⑷從肌肉營養(yǎng)組成看，T-2毒素對半胱氨酸影響不顯著，對賴氨酸影響顯著，對其它15種氨基酸、總氨基酸

10、、必需氨基酸、半必需氨基酸、蝦味氨基酸和鮮味氨基酸含量影響極顯著；根據(jù)AAS，無論對蝦是否受到T-2毒素污染，凡納濱對蝦肌肉的第一限制性氨基酸均為亮氨酸；根據(jù)EAAI，低劑量T-2毒素刺激凡納濱對蝦肌肉的必需氨基酸指數(shù)升高，而高劑量T-2毒素使凡納濱對蝦肌肉的必需氨基酸指數(shù)降低；⑸從肌肉酶學指標看，T-2毒素劑量在0-12.2ppm范圍內，肌肉的Ca2+-ATPase活性呈現(xiàn)上升-下降-上升變化趨勢；PPO活性呈現(xiàn)下降-上升-下降變化趨

11、勢，再一次說明凡納濱對蝦對 T-2毒素易感性不一致；T-2毒素對肌肉AST活性影響不顯著，對ALT活性影響顯著，隨T-2毒素劑量與ALT活性呈正相關。
　　4.根據(jù)灰色關聯(lián)度分析法，得到與飼料中T-2毒素劑量最為相關的各種類型肌肉品質指標分別為肝重比、熟制肌肉的內聚性、膠原蛋白含量、絲氨酸含量和ALT活性；各典型性狀指標與T-2毒素劑量的擬合公式分別為y=-85137+85237·(1+10-0.15·(20+x))–1，y=-1

12、05683+105783·(1+10-0.13·(24.7+x))–1，y=-146558+146654·(1+10-0.46·(6.98+x))–1，y=-187680+187778·(1+10-0.15·(22.29+x))–1，y=-110353+110459·(1+10-0.08·(38.53+x))–1，各指標的ED50分別為1.45、1.54、0.70、1.33、1.69 mg·kg-1·feed；其中膠原蛋白含量的ED50