膽堿酯酶催化活性濃度測(cè)量參考方法的建立.pdf

1、目的:研究膽堿酯酶催化活性濃度測(cè)量方法的影響因素,建立膽堿酯酶催化活性濃度測(cè)量參考方法。
　　方法:⑴收集近20年國(guó)內(nèi)外膽堿酯酶測(cè)量方法,按膽堿酯酶質(zhì)量和酶催化活性濃度二類膽堿酯酶被測(cè)量將其測(cè)量方法分類,根據(jù)測(cè)量方法標(biāo)準(zhǔn)化、自動(dòng)化的可行性、試劑來(lái)源與成本等條件篩選膽堿酯酶測(cè)量參考方法的被測(cè)量。⑵按膽堿酯酶測(cè)量原理將收集的測(cè)量方法分類,根據(jù)膽堿酯酶測(cè)量方法的優(yōu)越性、測(cè)量方法的市場(chǎng)占有率、各測(cè)量方法的試劑來(lái)源及成本等因素選擇適宜的膽堿

2、酯酶測(cè)量原理,并以此原理篩選目前市售膽堿酯酶試劑盒,進(jìn)行測(cè)量精密度與線性的評(píng)價(jià),初步確定膽堿酯酶測(cè)量參考方法的測(cè)量原理。⑶根據(jù)酶學(xué)測(cè)量的基礎(chǔ)理論、酶學(xué)測(cè)量參考方法的研究現(xiàn)狀、膽堿酯酶催化活性濃度測(cè)量的原理和特點(diǎn),確定影響膽堿酯酶催化活性濃度測(cè)量參考方法的測(cè)量因素及其最適測(cè)量條件。⑷應(yīng)用經(jīng)典的單因素分析法,選擇影響膽堿酯酶催化活性濃度測(cè)量的試劑因素及其最適測(cè)量條件。⑸應(yīng)用響應(yīng)面分析法優(yōu)化膽堿酯酶測(cè)量參考方法的關(guān)鍵影響因素的測(cè)量條件。⑹通過(guò)

3、實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證響應(yīng)面分析法確定的各關(guān)鍵影響因素最佳測(cè)量條件的合理性。
　　結(jié)果:⑴膽堿酯酶測(cè)量參考方法的被測(cè)量為膽堿酯酶催化活性濃度。⑵膽堿酯酶催化活性濃度測(cè)量參考方法的測(cè)量原理為:丁酰硫代膽堿/DTNB法。⑶膽堿酯酶催化活性濃度測(cè)量參考方法的測(cè)量因素及最適測(cè)量條件為:測(cè)量溫度37℃、光徑1cm、檢測(cè)波長(zhǎng)405nm、摩爾吸光系數(shù)13300LM-1cm-1、帶寬2nm、樣本體積比1:251(0.0040)、延遲時(shí)間60s、測(cè)量時(shí)間90s。

4、⑷采用單因素分析法確定膽堿酯酶催化活性濃度測(cè)量參考方法的試劑因素及其測(cè)量條件為:丁酰硫代膽堿濃度1.48m mol/L、DTN B濃度0.3m mol/L、緩沖液pH值8.0。⑸應(yīng)用響應(yīng)面分析法優(yōu)化膽堿酯酶催化活性濃度測(cè)量參考方法的關(guān)鍵影響因素的測(cè)量條件為:丁酰硫代膽堿濃度13.4 mmol/L、DTNB濃度0.29 mmol/L、緩沖液pH8.1。⑹以膽堿酯酶測(cè)量參考方法最適測(cè)量條件檢測(cè)臨床血清樣本催化活性濃度值為8755U/L,為響