酶法制備n-3多不飽和脂肪酸甘油三酯的工藝.pdf

1、以DHA和EPA為代表的n-3多不飽和脂肪酸在人體的營養(yǎng)、發(fā)育和健康等方面起著重要作用。DHA和EPA食用的最好形式為甘油三酯，但是天然甘油三酯型魚油中DHA和EPA含量較低，本文利用生物酶法催化酯交換反應(yīng)制備含DHA和EPA含量在45％的甘油三酯，主要研究內(nèi)容如下：
　　 1測定了包括脂肪酶J、U、P、T、B、L、M、N、Lipozyme TL IM和LipozymeRM IM在內(nèi)的10種脂肪酶的含水量和水解酶活，并建立了在無

2、溶劑體系中測定脂肪酶酯交換酶活的方法，在此基礎(chǔ)上比較了各脂肪酶的酯交換酶活。在10種脂肪酶中，來自褶皺假絲酵母(Candida Rugosa)的脂肪酶M水解酶活最高(為4702.7 U/g)，其次為脂肪酶L，Lipozyme TL IM和Lipozyme RM IM的水解酶活分別為356.7 U/g和407.2 U/g。酯交換酶活的測定以正辛酸乙酯和三油酸甘油酯為底物，反應(yīng)條件為：正辛酸乙酯和三油酸甘油酯的質(zhì)量比為1:1，脂肪酶添加量為

3、1％(占底物總質(zhì)量)，反應(yīng)溫度為60℃，反應(yīng)時間為2h。利用該方法測得脂肪酶M的酯交換酶活最高，大約是常用于催化酯交換反應(yīng)的Lipozyme RM IM的兩倍。因此選用脂肪酶M作為酯交換反應(yīng)的催化劑，制備含45％DHA和EPA的甘油三酯。通過對脂肪酶水解活力和酯交換活力的比較，發(fā)現(xiàn)脂肪酶的水解活力與酯交換活力之間的相關(guān)性不高。
　　 2建立了一種正相高效液相色譜.蒸發(fā)光散射檢測器聯(lián)用的方法，用于測定魚油中甘油酯組成。色譜柱為Rx

4、-SIL型正相硅膠色譜分析柱(250mm×4.6mmi.d.，5μm)，柱溫為35℃；流動相為正己烷-異丙醇-乙酸(90:10:0.2，V/V)，流速為0.8mL/min；蒸發(fā)光散射檢測器漂移管溫度60℃，載氣流速1.4L/min，可在12min內(nèi)完成一個樣品的測定。標準品的色譜峰與進樣質(zhì)量成線性關(guān)系，峰面積變異系數(shù)小于1.5％，最低檢出限為0.02-0.05μg，加標回收率為98.25％-103.08％。該方法可以較為快速準確地測定甘

5、油酯混合物中甘油三酯、甘油二酯和單甘油酯的含量，而不受脂肪酸組成的影響。
　　 3利用篩選出的脂肪酶M催化酯交換反應(yīng)，在無溶劑體系中制備DHA和EPA含量達45％的甘油三酯。首先比較了酯交換反應(yīng)中酸解和酯-酯交換反應(yīng)的優(yōu)缺點，在相同的反應(yīng)條件下，酸解反應(yīng)的速度略快于酯-酯交換反應(yīng)。綜合考慮酸解反應(yīng)和酯-酯交換反應(yīng)工藝過程的優(yōu)缺點，選擇酯-酯交換法用于制備EPA和DHA總含量在45％的甘油三酯。利用魚油乙酯和甘油三酯(EPA和DH

6、A含量為28.87％)作為底物，考察了溫度(40℃-70℃)、反應(yīng)時間(6-60h)、加酶量(40-200U)、底物質(zhì)量比(2:1-1:3)、加水量(0.5％-8％)以及乙酯魚油中EPA和DHA的含量對酯交換反應(yīng)的影響，通過正交試驗發(fā)現(xiàn)，在選定的因素水平范圍內(nèi)，反應(yīng)時間對酯交換結(jié)果的影響最大，其次是加酶量，對酯交換反應(yīng)影響最小的是底物質(zhì)量比，得到的較優(yōu)的工藝條件為：反應(yīng)溫度60℃，反應(yīng)時間24h，底物質(zhì)量比為5:4，加酶量為80U，不向