太平洋磷蝦磷脂提取純化及酶法制備富含n-3多不飽和脂肪酸磷脂的研究.pdf

1、以DHA、EPA為代表的n-3多不飽和脂肪酸(n-3 PUFA)具有重要的生理功能,如增進(jìn)視覺系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育、預(yù)防心腦血管疾病、抗炎作用等。n-3 PUFA有兩種天然存在的形式,甘油酯型和磷脂型。n-3 PUFA甘油酯型產(chǎn)品因n-3 PUFA結(jié)合在甘油酯分子上具有一定的生理功能,一直受到人們的關(guān)注。然而已有研究表明,n-3 PUFA磷脂型產(chǎn)品在消化吸收、穩(wěn)定性及生物利用度等活性方面優(yōu)于n-3 PUFA甘油酯型產(chǎn)品。天然形式的n-3

2、PUFA磷脂中,n-3 PUFA通常含量較低,且其來源有限,因此對(duì)如何提高磷脂型產(chǎn)品中n-3 PUFA含量的研究十分必要,并且具有良好的開發(fā)應(yīng)用前景。目前,酶法制備n-3 PUFA磷脂的研究對(duì)象主要集中在大豆磷脂和蛋黃磷脂上,罕見對(duì)海洋動(dòng)物磷脂的研究。
　　本論文以太平洋磷蝦為原料,首先研究了太平洋磷蝦磷脂的提取純化工藝,其次以得到的太平洋磷蝦磷脂為底物,研究了酶法制備富含n-3 PUFA磷脂的工藝,最后對(duì)產(chǎn)物磷脂的氧化穩(wěn)定性進(jìn)行

3、研究。具體研究內(nèi)容及結(jié)果如下:
　　首先,采用有機(jī)溶劑乙醇提取太平洋磷蝦磷脂,同時(shí)通過單因素和正交實(shí)驗(yàn)對(duì)提取工藝進(jìn)行優(yōu)化,再用丙酮沉降純化磷脂,并對(duì)磷脂的主要組分進(jìn)行分析。結(jié)果表明,最佳的提取工藝條件為:乙醇濃度95％,液固比6mL/g,提取時(shí)間4h,提取溫度40℃,在此最佳工藝條件下磷脂的得率為17.58%,純度為46.09%。經(jīng)過4℃丙酮沉降純化后,磷脂的純度提高到78.85%。通過高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(HPLC-E

4、LSD)分析磷脂的主要組分,結(jié)果表明,太平洋磷蝦磷脂中的主要組分包括磷脂酰膽堿(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE),含量分別為75.92%、11.28%。
　　其次,對(duì)太平洋磷蝦磷脂與游離n-3 PUFA之間的酯交換(酸解)反應(yīng)進(jìn)行了研究,分別比較了不同酶、不同反應(yīng)體系對(duì)反應(yīng)的影響,同時(shí)通過單因素和響應(yīng)曲面實(shí)驗(yàn)對(duì)影響酸解反應(yīng)的主要因素進(jìn)行了優(yōu)化,并將反應(yīng)前后磷脂的脂肪酸組成分析結(jié)果進(jìn)行對(duì)比。最終確定以固定化磷脂酶 A1為催化劑,無溶劑反

5、應(yīng)體系進(jìn)行反應(yīng)。得到反應(yīng)的最佳工藝條件為:加酶量(以磷脂質(zhì)量計(jì))30%、反應(yīng)時(shí)間24h、反應(yīng)溫度53℃、底物質(zhì)量比(游離脂肪酸/磷脂)7.6。在此條件下反應(yīng)后,經(jīng)分析,產(chǎn)物磷脂中DHA含量達(dá)31.05%,EPA含量達(dá)13.88%。反應(yīng)前后太平洋磷蝦磷脂DHA和EPA總含量由19.79%增加到44.93%。表明本方法有利于提高太平洋磷蝦磷脂中n-3 PUFA含量,可用于制備富含n-3 PUFA的磷脂。
　　最后,對(duì)原料磷脂和產(chǎn)物磷脂